本研究以福建采集的PEDV野生毒株為研究對象,通過對其主要功能基因S1、ORF3、M和N基因的序列比較和遺傳進化分析,并以ORF3基因為指征進行分子多樣性普查,綜合評定福建省PEDV毒株的分子遺傳學特征。同時利用原核表達系統(tǒng),通過基因重組技術(shù)實現(xiàn)PEDVS基因的一個中和抗原表位的克隆表達,將誘導表達的重組蛋白作為抗原免疫兔子,制備多克隆抗血清,為該疾病的防控提供有效的數(shù)據(jù)參考。結(jié)果如下： l.PEDV福建株P(guān)55、P68和F422與GeneBank中的參考毒株的S1、ORF3、M和N基因基因序列分析表明：S1蛋白區(qū)域中,未出現(xiàn)特殊的大片段插入或缺失變異,僅有少量點突變存在；在ORF3蛋白區(qū)域中,P55和F422均存在獨特的點突變,而P68不存在特有點突變,最為獨特的是P55毒株的ORF3基因出現(xiàn)了大片段的缺失；未在M蛋白和N蛋白中發(fā)現(xiàn)特殊的缺失,不同毒株之間均存在少量點突變。 2. PEDV福建株P(guān)55、P68和F422與GeneBank中的參考毒株的S1、ORF3、M和N基因系統(tǒng)發(fā)育分析顯示：S1蛋白、ORF3蛋白、M蛋白、N蛋白片段的遺傳變異度分別為7.5、6.8、2.4、3...

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中文文摘
目錄
第一章 緒論
    1.1 PEDV病毒的基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.1 復制酶多聚蛋白基因及其編碼蛋白
        1.1.2 纖突蛋白S基因及其編碼蛋白
        1.1.3 ORF3基因及其編碼蛋白
        1.1.4 sM基因及其編碼蛋白
        1.1.5 膜糖蛋白M基因及其編碼蛋白
        1.1.6 核衣殼蛋白N基因及其編碼蛋白
    1.2 PEDV結(jié)構(gòu)蛋白克隆表達的研究進展
        1.2.1 PEDV結(jié)構(gòu)蛋白的表達體系
        1.2.2 PEDV各結(jié)構(gòu)蛋白的表達
    1.3 本研究的目的和意義
    1.4 本研究的創(chuàng)新點
第二章 PEDV S1基因的分析比對
    2.1 材料
        2.1.1 實驗試劑
        2.1.2 主要儀器設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 病料收集與處理
        2.2.2 引物的設計與合成
        2.2.3 總RNA的提取
        2.2.4 PEDV S1基因的擴增
        2.2.5 序列比對、進化樹分析及蛋白預測分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 基因的序列分析
        2.3.2 S1蛋白的系統(tǒng)進化分析
        2.3.3 S1蛋白預測分析
    2.4 小結(jié)
第三章 PEDV ORF3基因的分析比對
    3.1 材料
        3.1.1 實驗試劑
        3.1.2 主要儀器設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 病料收集與處理
        3.2.2 引物的設計與合成
        3.2.3 總RNA的提取
        3.2.4 PEDV ORF3基因的擴增
        3.2.5 序列比對、進化樹分析及蛋白預測分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 ORF3基因的序列分析
        3.3.2 ORF3蛋白的系統(tǒng)進化分析
        3.3.3 ORF3蛋白預測分析
    3.4 小結(jié)
第四章 PEDV M基因的分析比對
    4.1 材料
        4.1.1 實驗試劑
        4.1.2 主要儀器設備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 病料收集與處理
        4.2.2 引物的設計與合成
        4.2.3 總RNA的提取
        4.2.4 PEDV M基因的擴增
        4.2.5 序列比對、進化樹分析及蛋白預測分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 M基因的序列分析
        4.3.2 M蛋白系統(tǒng)進化分析
        4.3.3 M蛋白預測分析
    4.4 小結(jié)
第五章 PEDV N基因的分析比對
    5.1 材料
        5.1.1 實驗試劑
        5.1.2 主要儀器設備
    5.2 實驗方法
        5.2.1 病料收集與處理
        5.2.2 引物的設計與合成
        5.2.3 總RNA的提取
        5.2.4 PEDV N基因的擴增
        5.2.5 序列比對、進化樹分析及蛋白預測分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 N基因的序列分析
        5.3.2 N蛋白系統(tǒng)進化分析
        5.3.3 N蛋白預測分析
    5.4 小結(jié)
第六章 27個PEDV福建樣品的分子多樣性調(diào)查
    6.1 材料
        6.1.1 實驗試劑
        6.1.2 主要儀器設備
    6.2 實驗方法
        6.2.1 病料收集與處理
        6.2.2 引物的設計與合成
        6.2.3 總RNA的提取
        6.2.4 PEDV ORF3基因的擴增
        6.2.5 序列比對及進化樹分析
    6.3 結(jié)果
        6.3.1 病毒樣品的收集
        6.3.2 序列分析
        6.3.3 系統(tǒng)發(fā)育分析
    6.4 小結(jié)
第七章 PEDV S基因的中和抗原表位的原核克隆表達
    7.1 材料
        7.1.1 實驗試劑
        7.1.2 菌株及質(zhì)粒
        7.1.3 主要儀器設備
    7.2 實驗方法
        7.2.1 PEDV病毒RNA的提取
        7.2.2 表達載體pET-32a-S1A的構(gòu)建與鑒定
        7.2.3 含有目的基因的表達菌株E.coli BL21(DE3)的構(gòu)建與鑒定
        7.2.4 目的基因在大腸桿菌中的誘導表達
        7.2.5 割膠回收純化目的蛋白
        7.2.6 PEDV部分S蛋白多克隆兔抗血清的制備
        7.2.7 間接酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清抗體效價
    7.3 結(jié)果
        7.3.1 目的基因的克隆
        7.3.2 目的蛋白的表達純化
        7.3.3 兔抗血清的制備
    7.4 小結(jié)
總結(jié)與討論
參考文獻
攻讀學位期間承擔的科研任務與主要成果
致謝
個人簡歷



本文編號：4043157