長鏈非編碼RNA NRON(ncRNA repressor of the nuclear factor of activated T cells)是活化T細(xì)胞核因子NFAT(nuclear factor of activated T cells)的非編碼RNA抑制物。近年來的研究發(fā)現(xiàn)NRON及NFAT,除了與心肌、骨骼肌發(fā)育相關(guān),而且同脂肪細(xì)胞分化也有關(guān)系。此外,NFAT蛋白活性激活有賴于鈣/鈣調(diào)蛋白依賴的磷酸酶和鈣調(diào)磷酸酶(calcineurin,Cn)通路,并且鈣調(diào)磷酸酶參與調(diào)節(jié)NFAT的脫磷酸化,影響NRON與NFAT通過RNA-蛋白復(fù)合物的形式來發(fā)揮作用;同時(shí),此鈣調(diào)信號通路可以調(diào)節(jié)溶酶體形成,影響自噬體行使降解功能。由此可見,長鏈非編碼RNA NRON可能通過自噬通路來調(diào)控肉雞脂肪生成。本研究以東北農(nóng)業(yè)大學(xué)肉雞腹脂雙向選擇系為材料,使用肉雞各部分組織及前脂肪細(xì)胞,并通過基礎(chǔ)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)(Real-time RT-PCR、Western Blot、細(xì)胞培養(yǎng)、PCRRFLP技術(shù)等),初步探討NRON與肉雞脂肪生成間的關(guān)系。主要研究結(jié)果如下:(1)基于高、低脂系雞基因組重測序結(jié)...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 研究背景與科學(xué)意義
        1.1.1 現(xiàn)代肉雞育種及生產(chǎn)的需要
        1.1.2 探索脂肪生成的相關(guān)調(diào)控機(jī)制
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 長鏈非編碼RNA研究進(jìn)展
        1.2.2 脂肪性狀相關(guān)的lncRNA研究進(jìn)展
        1.2.3 NRON及NFAT基因研究進(jìn)展
        1.2.4 lncRNA與自噬通路
    1.3 本研究的目標(biāo)、內(nèi)容和研究方案
        1.3.1 研究目標(biāo)
        1.3.2 研究內(nèi)容
        1.3.3 研究方案
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 組織樣采取
        2.1.3 主要藥品與試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 緩沖液與常用試劑的配制
        2.1.6 主要分子生物學(xué)軟件
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 總RNA的提取
        2.2.2 總RNA的反轉(zhuǎn)錄
        2.2.3 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.2.4 Real-time RT-PCR
        2.2.5 PCR擴(kuò)增
        2.2.6 酶切反應(yīng)
        2.2.7 基因效應(yīng)分析
        2.2.8 雞前脂肪細(xì)胞的分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化
        2.2.9 雞前脂肪細(xì)胞系(ICP-1)的培養(yǎng)
        2.2.10 油紅O染色、提取比色及蛋白校正
        2.2.11 蛋白免疫印跡
        2.2.12 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 雞NRON基因多態(tài)性檢測
        3.1.1 SNP位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)
        3.1.2 多態(tài)性檢測分析
        3.1.3 連鎖不平衡分析
    3.2 雞NRON和NFAT基因表達(dá)規(guī)律
        3.2.1 NRON基因在肉雞不同組織中的表達(dá)規(guī)律
        3.2.2 NFAT基因在肉雞腹部脂肪組織中的表達(dá)規(guī)律
        3.2.3 NRON及NFAT基因在誘導(dǎo)分化的前脂肪細(xì)胞中表達(dá)規(guī)律
    3.3 在誘導(dǎo)分化前脂肪細(xì)胞中抑制鈣調(diào)磷酸酶
    3.4 自噬相關(guān)基因在細(xì)胞和組織中的表達(dá)規(guī)律
        3.4.1 ATG5和BECN1 mRNA在腹部脂肪組織中的表達(dá)規(guī)律
        3.4.2 ATG5和BECN1蛋白在腹部脂肪組織中的表達(dá)規(guī)律
        3.4.3 ATG5和BECN1 mRNA在誘導(dǎo)分化前脂肪細(xì)胞中的表達(dá)規(guī)律
4 討論
    4.1 NRON基因與肌肉生長發(fā)育
    4.2 NRON及NFAT基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
    4.3 自噬與脂肪生成
        4.3.1 脂肪組織和前脂肪細(xì)胞中的自噬發(fā)生
        4.3.2 鈣調(diào)磷酸酶介導(dǎo)的自噬發(fā)生
5 結(jié)論
6 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3842590