發(fā)布時間：2023-08-17 20:12

　　本研究旨在探討低氧誘導因子-1α(HIF-1α)對牦牛腎小管上皮細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的影響。首先對牦牛腎小管上皮細胞進行培養(yǎng)鑒定,并選取第三代細胞對其分別進行藥物處理(DMOG組)和不做藥物處理(對照組),檢測EMT相關基因在mRNA和蛋白水平的表達變化,并觀察細胞形態(tài)變化。結果表明:使用Ⅰ+Ⅱ型膠原酶可以更好地獲得腎小管上皮細胞;免疫熒光結果細胞CK18表達呈陽性,Vimentin和CD31呈陰性表達;qRT-PCR和Western blot結果表明,DMOG組中的HIF-1α,TGF-β1,α-SMA在mRNA和蛋白水平均較對照組有極顯著增加(P<0.01),而E-cadherin的表達顯著降低(P<0.05);經(jīng)藥物干預后,細胞形態(tài)由鋪路石樣轉(zhuǎn)變?yōu)殚L梭形,經(jīng)鑒定長梭形細胞為間質(zhì)細胞。本研究成功建立了牦牛腎小管上皮細胞的分離培養(yǎng)體系,并發(fā)現(xiàn)HIF-1α表達上調(diào)可以促進牦牛腎小管上皮細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗樣品
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 牦牛腎小管上皮細胞的分離培養(yǎng)
    1.4 牦牛腎小管上皮細胞的活性測定
    1.5 細胞免疫熒光鑒定
    1.6 實時熒光定量PCR
    1.7 Western blot
    1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
2 結 果
    2.1 消化酶的選擇
    2.2 生長曲線測定
    2.3 牦牛腎小管上皮細胞的鑒定
    2.4 qRT-PCR檢測HIF-1α,TGF-β1,E-cadherin和α-SMA的mRNA表達
    2.5 Western blot檢測HIF-1α,TGF-β1,E-cadherin和α-SMA的蛋白表達
    2.6 藥物干預前后的細胞形態(tài)變化及轉(zhuǎn)化后的細胞鑒定
3 討 論
4 結 論



本文編號：3842506