【摘要】：沙門(mén)菌(Salmonella)是一種重要的人畜共患病的腸道致病菌,嚴(yán)重威脅人和動(dòng)物的健康和生命安全,一直是公共衛(wèi)生學(xué)和獸醫(yī)學(xué)討論的熱點(diǎn)話題。近年來(lái)隨著抗菌藥物的廣泛使用和濫用,雞源沙門(mén)菌對(duì)抗菌藥物的抗性快速傳播,尤其呈多重耐藥的菌株更加明顯。本試驗(yàn)的目的是研究雞源沙門(mén)菌的藥物敏感性特征、耐藥基因檢測(cè)及其流行性特征,以及1株耐四環(huán)素類(lèi)抗生素的tetM基因的上下游環(huán)境。通過(guò)細(xì)菌分離鑒定、藥敏試驗(yàn)、耐藥基因檢測(cè),研究雞源沙門(mén)菌多重耐藥性;通過(guò)ERIC-PCR研究產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)和AmpC酶的雞源沙門(mén)菌之間的進(jìn)化關(guān)系;通過(guò)接合試驗(yàn)、質(zhì)粒提取、質(zhì)粒不相容群分析、Overlapping PCR分析tetM基因的上下游環(huán)境。1、2016年9月至2017年12月從河南、湖北、山西、江西、湖南、安徽、陜西等7個(gè)省份合作養(yǎng)雞場(chǎng)中采集疑似沙門(mén)菌感染的病死雞的肝臟樣品860份,參考食品衛(wèi)生衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)沙門(mén)菌檢驗(yàn)(GB/T4789.4-2010)標(biāo)準(zhǔn),具體通過(guò)SS瓊脂、科瑪嘉沙門(mén)菌顯色培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌初篩,再通過(guò)16S rRNA和特有侵襲基因(invA)擴(kuò)增、測(cè)序進(jìn)行鑒定,最終分離出156株雞源沙門(mén)菌。2、根據(jù)CLSI推薦的標(biāo)準(zhǔn),采用微量肉湯稀釋法對(duì)156株雞源沙門(mén)菌分離株進(jìn)行了13種常用抗菌藥物的藥物敏感性試驗(yàn),結(jié)果顯示,分離株對(duì)阿莫西林、土霉素、磺胺、多西環(huán)素的耐藥率最高,分別為100%、99%、97%和87%;其次為氟苯尼考、恩諾沙星、慶大霉素,耐藥率分別為57%、49%、49%;對(duì)頭孢噻呋、頭孢喹肟、喹乙醇、痢菌凈較為敏感,耐藥率為27%、26%、22%、15%;對(duì)阿米卡星和黏菌素最敏感,敏感率為97%、99%;并且分離株全部為多重耐藥株,最低對(duì)3種抗菌藥物耐藥,最高對(duì)11種抗菌藥物耐藥,87%沙門(mén)菌對(duì)5種及其以上抗菌藥物耐藥,說(shuō)明沙門(mén)菌多重耐藥株較多。3、用PCR方法擴(kuò)增相應(yīng)的耐藥基因,并對(duì)部分分離株進(jìn)行接合試驗(yàn)。耐藥基因擴(kuò)增顯示,對(duì)于β-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥基因,10株產(chǎn)CTX型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶,其中5株為CTX-M-65,3株為CTX-M-14,2株為CTX-M-55;bla_(OXA-1)檢出陽(yáng)性29株,bla_(OXA-2)檢出陽(yáng)性18株,bla_(TEM)檢出陽(yáng)性41株;對(duì)于產(chǎn)AmpC酶的雞源沙門(mén)菌,4株為bla_(cmy-2),未檢測(cè)到bla_(SHV)。對(duì)于四環(huán)素類(lèi)耐藥基因,tetA和tetB檢出率較高,分別為51%、38%,tetC和tetM檢出率較低,分別只檢測(cè)到8株和1株,未檢測(cè)到tetD。對(duì)于氨基糖苷類(lèi)耐藥基因,只檢測(cè)到rmtB,檢出率為3%。對(duì)于氟苯尼考耐藥基因,floR檢出率為35%。對(duì)于喹乙醇通過(guò)質(zhì)粒介導(dǎo)的多藥外排泵耐藥基因,oqxA和oqxB檢出率均為13%。磺胺耐藥基因sul 1檢出率最高,高達(dá)96%。質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類(lèi)一系列耐藥基因均未檢測(cè)出。接合試驗(yàn)顯示,成功獲得1株含tetM的接合子,質(zhì)粒類(lèi)型為FIA、FIB、FII。4、在ESBLs中,CTX-M型ESBLs較常見(jiàn),也呈多樣流行,bla_(CTX-M)基因的下游因亞族不同而存在差異,CTX-M-1族大多為orf477,而CTX-M-9族大多為IS903,而上游普遍存在ISECp1。5、通過(guò)定位PCR可知,tetM基因上游為轉(zhuǎn)座基因tnpA1、Tn916的不完整orf13閱讀框片段,下游與不完整的轉(zhuǎn)座基因tnpR相連。
【圖文】：

圖 1-1 革蘭氏染色圖Fig1-1 Gram stains of Salmonella 和沙門(mén)菌特異性基因 invA 的擴(kuò)增和測(cè)序，結(jié)果從 860 份樣品

圖 1-2 invA 基因擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳圖Fig1-2 Agarose gel electrophoresis of invA gene PCR products源沙門(mén)菌耐藥譜雞源沙門(mén)菌進(jìn)行耐藥譜分析，，結(jié)果顯示，多重耐藥譜 AMO-OXOX-ST-FFC 所 占 得 比 例 較 高 ， 均 為 10% ， 并 且 主 要 的 多
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S852.61

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2643481