【摘要】：泰勒蟲(Theileria)和無漿體(Anaplasma)是2種重要的蜱傳性血液原蟲,已在世界上多個國家和地區(qū)發(fā)現其感染。Theileria及Anaplasma主要感染熱帶及亞熱帶的反芻動物,嚴重危害動物健康,降低動物的生產性能。陜西省是重要的養(yǎng)羊大省,擁有眾多的地方品種。本研究利用顯微鏡檢查及序列分析技術對陜西省部分地區(qū)不同品種和年齡山羊的Theileria及Anaplasma的感染率和種類進行了較為系統(tǒng)的研究。1.本研究采集了陜西省米脂縣、綏德縣、清澗縣、三原縣、藍田縣、麟游縣及鎮(zhèn)巴縣的14個養(yǎng)殖場的509份山羊血液樣品,血液涂片和吉姆薩染色發(fā)現268份(52.7%)血液樣品存在泰勒蟲的感染。發(fā)現了3種蟲體形態(tài),其中圓點形蟲體大小為1.0μm~2.2μm,卵圓形蟲體大小為0.9μm~1.1μm×1.7μm~3.0μm,短桿狀蟲體大小為0.8μm~1.2μm×1.7~3.0μm。不同地區(qū)Theileria的感染率差異極顯著(P0.01),其中鎮(zhèn)巴縣感染率最高(92.6%,112/121),而三原縣未發(fā)現感染;不同品種Theileria的感染率差異極顯著(P0.01),陜南白山羊感染率(92.6%,112/121)顯著高于其他品種山羊,其次為關中奶山羊(55.1%,125/227)和陜北白絨山羊(22.3%,31/139),而薩能奶山羊未發(fā)現泰勒蟲的感染;4個年齡段山羊的Theileria感染率差異也極顯著(P0.01),其中7~12月齡山羊的感染率最高(76.7%,46/60),而3~6月齡的感染率(19.2%,19/99)最低。基于Theileria SSU rRNA基因對顯微鏡檢查陽性樣品進行巢式PCR擴增發(fā)現,所有顯微鏡檢查陽性樣品均能擴增出單一目的條帶,序列分析發(fā)現存在2種泰勒蟲蟲種,即T.luwenshuni及Theileria sp.OT3;其中,T.luwenshuni為優(yōu)勢種,廣泛分布于米脂縣、綏德縣、清澗縣、藍田縣及麟游縣,而Theileria sp.OT3僅發(fā)現于麟游縣12月齡以上的關中奶山羊。2.對7個縣的14個養(yǎng)殖場采集的509份山羊血液樣品進行Anaplasma分子檢測發(fā)現,總感染率為58.5%(298/509)。不同地區(qū)Anaplasma的感染率差異極顯著(P0.01),鎮(zhèn)巴縣的感染率(84.3%,102/121)極顯著(P0.01)高于其他6個地區(qū),而三原縣未發(fā)現感染;不同品種山羊的Anaplasma感染率差異極顯著(P0.01),陜南白山羊感染率最高(84.3%,102/121),其次為陜北白絨山羊(58.3%,81/139)和關中奶山羊(50.2%,114/227),感染率最低的為薩能奶山羊(4.5%,1/22);不同年齡Anaplasma感染率差異極顯著(P0.01),0~2月齡的Anaplasma感染率最高(80.0%,12/15),而3~6月齡Anaplasma感染率最低(44.4%,44/99)。種系發(fā)育分析發(fā)現,本研究所調查地區(qū)存在3個Anaplasma種類:A.bovis、A.ovis和A.phagocytophilum。其中,A.bovis廣泛分布于麟游縣、藍田縣、米脂縣、綏德縣、清澗縣及鎮(zhèn)巴縣的所有年齡段;A.ovis分布于麟游縣、米脂縣、綏德縣及清澗縣的所有年齡段;而A.phagocytophilum在麟游縣、藍田縣、綏德縣、清澗縣及鎮(zhèn)巴縣所有山羊年齡段中均能檢測到。所檢測的509份山羊血液樣品中114份(22.4%)同時感染2種或2種以上Anaplasma,6份(1.2%)同時感染3種Anaplasma。A.bovis見于所有山羊品種,A.phagocytophilum見于關中奶山羊、陜北白絨山羊及陜南白山羊,而A.ovis僅見于關中奶山羊及陜北白絨山羊。綜上所述,陜西省部分地區(qū)山羊存在Theileria及Anaplasma的感染,Anaplasma的感染率略大于Theileria,共檢測到2種Theileria(T.lunwenshuni及Theileria sp.OT3)和3種Anaplasma(A.bovis、A.ovis及A.phagocytophilum)。這些研究結果為陜西省乃至全國的山羊Theileria及Anaplasma感染的防控措施的制定提供了基礎資料。
【圖文】：

圖 2-1 陜西省部分地區(qū)山羊樣品來源Fig. 2-1 Origins of goats in partial areas of Shaanxi province主要儀器設備凈工作臺（SW-CJ-1B，蘇州安泰空氣技術有限公司，中國）、PCR 基因-D，博日科技有限公司，中國）、臺式高速離心機（HC-3018，中科中佳公司，，中國）、瓊脂糖水平電泳儀（DYCP-31，六一生物科技有限公司，膠成像系統(tǒng)（ChampGel 5000，北京賽智創(chuàng)業(yè)科技有限公司，中國）、精Y220，光學儀器一廠，中國）、高壓蒸汽滅菌鍋（上海博迅實業(yè)有限公中國）、微量移液器（北京大龍興創(chuàng)實驗儀器有限公司，中國）等。主要試劑姆薩染色液（北京索寶生物科技有限公司，中國）、血液基因組 DNA 提54，上海生工生物工程股份有限公司產品，中國）；Ex Taq DNA 聚合酶、6DL 5000 DNA marker、溴化乙錠（Ethidiumbromide，EB）（寶日醫(yī)生物

（neighbor-Joining，NJ）構建 SSU rRNA 基因系統(tǒng)進化樹，Bootstrap 值設置為 1 000。2.1.2.7 統(tǒng)計學分析利用 SPSS 19.0 軟件對陜西省部分地區(qū)山羊泰勒蟲不同地區(qū)、不同品種、不同年齡間的感染率差異進行 χ2檢驗，當 P < 0.05 時，差異顯著；當 P < 0.01 時，差異極顯著。2.2 結果2.2.1 山羊泰勒蟲的形態(tài)學觀察結果通過對制備的血液涂片進行顯微鏡觀察，發(fā)現 509 份血液樣品中有 268（52.7%）份樣品紅細胞內存在大小約 1 μm 呈圓點形、卵圓形或短桿狀多形性蟲體，一般均小于紅細胞半徑，蟲體細胞核呈深染的紫紅色，原生質呈淡染藍色（圖 2-2）。其中圓點形蟲體大小為 1.0 μm～2.2 μm，卵圓形蟲體大小為 0.9 μm～1.1 μm×1.7 μm～3.0 μm，短桿狀蟲體大小為 0.8 μm～1.2 μm×1.7 μm～3.0 μm。進一步對陽性血液涂片進行染蟲率統(tǒng)計，發(fā)現 268 張陽性血液涂片總體染蟲率為 6.79%～86.44%。
【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S858.27

【參考文獻】

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本文編號：2643397