【摘要】：腸球菌多藥耐藥的特點(diǎn),以及耐萬(wàn)古霉素腸球菌的出現(xiàn),已引起醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)臨床的廣泛關(guān)注。氟苯尼考屬動(dòng)物專用廣譜抗生素,具有抗菌活性高、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn),主要用于牛、豬、雞和魚類等食品動(dòng)物的細(xì)菌性疾病。因此,研究腸球菌對(duì)氟苯尼考的耐藥機(jī)制,對(duì)于食品安全和人類健康具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。本試驗(yàn)從不同來(lái)源(人、豬糞和豬病變內(nèi)臟、生鮮肉和食品)分離、鑒定腸球菌149株。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)行了腸球菌藥敏試驗(yàn),氟苯尼考耐藥基因(cfr、fexA、fexB)的檢測(cè),質(zhì)粒接合和電轉(zhuǎn)化試驗(yàn),耐藥基因遺傳環(huán)境分析,來(lái)探討腸球菌對(duì)氟苯尼考的耐藥機(jī)制。并通過(guò)毒力島Marker基因esp的檢測(cè),細(xì)菌MLST分型等,來(lái)探討不同來(lái)源糞腸球菌發(fā)生傳播的可能性。結(jié)果顯示,共分離鑒定到糞腸球菌72株,屎腸球菌40株。149株腸球菌對(duì)慶大霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、奎奴普丁/達(dá)福普汀、紅霉素、氯霉素、氨芐西林、替考拉寧和氟苯尼考的耐藥率分別為94%、91%、73%、70%、62%、44%、36%、10%和7%。對(duì)11株氟苯尼考耐藥菌株進(jìn)行耐藥基因(cfr、fexA和fexB)檢測(cè),cfr均為陰性,fexA單陽(yáng)性3株,fexB單陽(yáng)性1株,fexA+fexB雙陽(yáng)性7株。質(zhì)粒接合和電轉(zhuǎn)化試驗(yàn)表明,攜帶fexA基因的質(zhì)�？梢园l(fā)生接合,攜帶fexB基因的質(zhì)�？梢园l(fā)生轉(zhuǎn)化。fexA、fexB基因位于質(zhì)粒上的特性有助于其發(fā)生水平轉(zhuǎn)移。fexB基因的遺傳環(huán)境分析顯示,fexB基因位于一個(gè)新型的兩端反向重復(fù)的插入序列內(nèi),該插入序列命名為ISEfa14。該插入序列形成的復(fù)合轉(zhuǎn)座子功能有待于進(jìn)一步試驗(yàn)證實(shí)。在人、豬和食品源糞腸球菌中檢測(cè)到esp陽(yáng)性菌株13株。其中,人源腸球菌7株均為ST4,1株為ST116;豬源腸球菌1株為ST4,1株暫未定型;食品源腸球菌2株ST16,1株ST69。豬源和人源糞腸球菌存在著一個(gè)共同的MLST型(ST4),表明豬源和人源糞腸球菌存在著傳播的可能性,其耐藥性和致病性值得進(jìn)一步關(guān)注。綜上所述,本研究調(diào)查了河南地區(qū)不同來(lái)源腸球菌(人、豬糞和豬病變內(nèi)臟、生鮮肉和食品)的耐藥狀況。在此基礎(chǔ)上,探討了腸球菌對(duì)氟苯尼考的耐藥機(jī)制,并新鑒定了一個(gè)插入序列ISEfa14,為fexB基因的水平擴(kuò)散提供了部分理論解釋。
[Abstract]:The characteristics of multidrug resistance of Enterococcus and the emergence of vancomycin resistant Enterococcus have attracted wide attention in medicine and veterinary clinic. Florfenicol is an animal specific broad-spectrum antibiotic with high antibacterial activity and low toxicity. It is mainly used for bacterial diseases in food animals such as cattle pigs chickens and fish. Therefore, the study of resistance mechanism of Enterococcus to florfenicol has important public health significance for food safety and human health. 149 strains of Enterococcus were isolated from different sources (human, pig manure, diseased viscera, fresh meat and food). On this basis, the drug sensitivity test of Enterococcus, detection of florfenicol resistance gene (cfr,fexA,fexB), plasmid conjugation and electrotransformation test, genetic environment analysis of drug resistance gene were carried out to explore the resistance mechanism of Enterococcus to florfenicol. The possibility of transmission of Enterococcus faecalis from different sources was studied by detecting esp of virulence island Marker gene and typing of bacteria MLST. The results showed that 72 strains of Enterococcus faecalis, 40 strains of Enterococcus faecium and 149 strains of Enterococcus faecium were isolated and identified as gentamicin, tetracycline, ciprofloxacin, quinaputin / dafopudine, erythromycin, chloramphenicol, ampicillin. The drug resistance rates of teicoplanin and florfenicol were 94 / 91 and 73 / 70, respectively. Eleven florfenicol resistant strains were detected by cfr,fexA and fexB. All of them were negative for fexA, 3 strains were single positive for fexB and 1 strain was double positive for fexA fexB. The results of plasmids conjugation and electrotransformation showed that plasmids carrying fexA gene could be conjugated. The character that the plasmid carrying fexB gene can be transformed. FexB gene is located on the plasmid. The genetic environment analysis of the horizontal transfer of the. FexB gene shows that the FexB gene is located in a new type of insert sequence with reverse repeat at both ends. The insert sequence is named ISEfa14. The function of the complex transposon formed by the insertion sequence needs to be confirmed by further experiments. Thirteen esp positive strains were detected in human, pig and food source Enterococcus faecalis. Among them, 7 strains of human Enterococcus were ST4,1 strains, 1 strain was ST116;, 1 strain was ST4,1 strain, and 2 strains of Enterococcus enterococcus from food were ST16,1 strain ST69.. There is a common MLST type (ST4) between porcine and human Enterococcus faecalis, which indicates that porcine and human Enterococcus faecalis can be transmitted, and its drug resistance and pathogenicity are worthy of further attention. To sum up, the drug resistance of Enterococcus from different sources (human, pig manure and diseased viscera, fresh meat and food) in Henan was investigated. On this basis, the drug resistance mechanism of Enterococcus to florfenicol was discussed, and a new insertion sequence ISEfa14, was identified, which provides some theoretical explanation for horizontal diffusion of fexB gene.
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.61

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本文編號(hào)：2241635