【摘要】：目的:初步探討大鼠結(jié)核性創(chuàng)面液化壞死高峰期中M1/M2型巨噬細(xì)胞浸潤情況及IFN-γ、IL-10細(xì)胞因子和巨噬細(xì)胞極化之間的關(guān)系。方法:1、35只雌性8周齡SD大鼠,選取結(jié)核菌純蛋白衍化物(PPD)試驗無反應(yīng)或弱反應(yīng)的30只大鼠,采取MP弗氏完全佐劑致敏;6周后采用隨機(jī)數(shù)字表法分為實驗組和陰性對照組,每組各15只;實驗組背部皮內(nèi)注射牛分枝桿菌減毒株(BCG)(5×10~7CFU/ml、0.2ml/只),陰性對照組背部皮內(nèi)注射無菌的PBS(0.2ml/只)。2、大體觀察創(chuàng)面演變情況;于注射后2、6、11d,行皮膚組織石蠟包埋切片(每個時相點每組取5只大鼠),蘇木精-伊紅染色觀察各組創(chuàng)面愈合的情況及愈合過程中炎癥細(xì)胞的浸潤變化;病原微生物學(xué)檢測鑒定菌株。3、液化壞死高峰期(注射后6d),行免疫組織化學(xué)染色,CD68標(biāo)記巨噬細(xì)胞,其亞型M1型巨噬細(xì)胞iNOS標(biāo)記、M2型巨噬細(xì)胞CD206標(biāo)記,通過免疫組織化學(xué)方法分析M1型和M2型巨噬細(xì)胞在實驗組及陰性對照組中的分布情況。4、液化壞死高峰期(注射后6d),分別從陰性對照組和實驗組皮膚組織提取總RNA,采用RT-PCR分析促炎癥細(xì)胞因子IFN-γmRNA和抗炎癥細(xì)胞因子IL-10mRNA在局部組織中的表達(dá)情況。5、數(shù)據(jù)比較采用獨立樣本t檢驗。結(jié)果:1、經(jīng)致敏大鼠,皮內(nèi)注射BCG后創(chuàng)面觀察到明顯的紅腫、液化、壞死和破潰等改變;蘇木精-伊紅染色顯示液化壞死漸進(jìn)增強(qiáng)后進(jìn)而有效愈合的病理過程;抗酸染色結(jié)果:陽性。2、免疫組織化學(xué)顯示:實驗組創(chuàng)面組織液化壞死高峰期中CD68巨噬細(xì)胞、iNOS M1型巨噬細(xì)胞、CD206 M2型巨噬細(xì)胞數(shù)量分別為(84.8±3.4)、(60.8±2.8)、(13.2±2.2)個/HP,均顯著高于陰性對照組(1.4±0.5)、(0.4±0.5)、(0.6±0.5)個/HP,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t=93.2、95.5、28.2,Ρ值均小于0.05);創(chuàng)面組織中iNOS M1型巨噬細(xì)胞[(60.8±2.78)個/HP]顯著高于CD206 M2型巨噬細(xì)胞[(13.2±2.18)個/HP],差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=27.6,Ρ0.05)。3、RT-PCR顯示:液化壞死高峰期局部組織微環(huán)境中,實驗組促炎癥細(xì)胞因子IFN-γmRNA的表達(dá)較陰性對照組明顯上調(diào)(t=23.9,Ρ0.05);抗炎癥細(xì)胞因子IL-10mRNA表達(dá)較陰性對照組明顯下調(diào)(t=16.2,Ρ0.05)。結(jié)論:1、經(jīng)過致敏的大鼠注射高濃度BCG可有效誘導(dǎo)液化和壞死,可成功構(gòu)建大鼠結(jié)核性創(chuàng)面模型;2、大鼠結(jié)核性創(chuàng)面液化壞死高峰期,創(chuàng)面組織局部微環(huán)境中,促炎癥細(xì)胞因子IFN-γ占主導(dǎo)優(yōu)勢時,以M1型巨噬細(xì)胞表達(dá)為主,有利于發(fā)揮巨噬細(xì)胞殺滅結(jié)核分枝桿菌的作用。
【圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2 結(jié) 果2.1 大鼠皮膚創(chuàng)面大體標(biāo)本觀察致敏階段和實驗組二次攻毒階段大鼠背部大體標(biāo)本觀察均顯示實驗組和陰性對照組二次攻毒階段形成的 3 個典型階段：紅腫期、液化壞死高峰期、愈合期；致敏期MP 弗氏完全佐劑成分復(fù)雜，僅含有結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁抗原；二次攻毒階段為含有BCG 活菌 PBS 溶液。通過比較創(chuàng)面形成的不同時期，二次攻毒階段創(chuàng)面的炎癥反應(yīng)較致敏階段輕，，見圖 2-1、2-2。實驗組創(chuàng)面紅腫期、液化壞死高峰期、愈合期所需時間都少于致敏階段，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.0、4.2、8.5，Ρ值均小于 0.05），見表2-1。致敏后陰性對照組注射無菌 PBS 無創(chuàng)面形成。

織從表皮液化壞死破潰流出，創(chuàng)面大小達(dá)到高峰；C：注射后 11 d，創(chuàng)面基本愈合，紅腫不明顯BCG：牛分枝桿菌減毒株）表 2-1 大鼠致敏階段、實驗組二次攻毒階段創(chuàng)面不同時期演變時間比較（d，x ±s）時相點 致敏階段a實驗組二次攻毒階段bt 值 Ρ值紅腫期 3.4±0.5 1.8±0.8 6.0 ＜0.05液化壞死高峰期 6.8±0.4 5.2±0.8 4.2 ＜0.05愈合期 16.6±1.0 12±1.6 8.5 ＜0.05注：a：致敏階段大鼠 30 只；b：實驗組二次攻毒階段大鼠 15 只2.2 大鼠創(chuàng)面組織病理學(xué)分析光學(xué)顯微鏡觀察注射高濃度 BCG 后結(jié)核性創(chuàng)面演變情況，相對于陰性對照組，實驗組顯示了創(chuàng)面紅腫期、液化壞死高峰期和愈合期病理改變過程，見圖 2-3、2-4
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R52

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 程琳;王瑞晨;賈赤宇;;結(jié)核性創(chuàng)面三維重建方法的臨床探索[J];中華燒傷雜志;2015年06期

2 賈赤宇;;結(jié)核性創(chuàng)面——一個被忽視且值得重視的臨床問題[J];中華損傷與修復(fù)雜志(電子版);2014年04期

3 王明珠;史大中;楊愛軍;焦志剛;祝秉東;張穎;;分枝桿菌所致家兔皮膚液化病理模型研究[J];微生物與感染;2008年04期

本文編號：2649970