研究目的：在本所建立和優(yōu)化人類精漿蛋白提取方法，建立較窄pH梯度（pH4-7）二維電泳圖譜和液化各個(gè)時(shí)間點(diǎn)寬pH梯度（pH3-10）二維電泳圖譜。利用差異蛋白質(zhì)組學(xué)的方法分析精漿蛋白在液化過(guò)程中各種蛋白的變化規(guī)律，初步探討其在精液液化和男性生殖中的作用。材料：隨機(jī)選取13名身體健康并排除遺傳病史，年齡在20—30歲之間，且精液確定已使AID病人受孕并分娩了正常的嬰兒的供精者，所有供精者都簽署了供精知情同意書(shū)。所有供精者在標(biāo)本采集前后微生物感染檢查均為陰性。收集正常男性精漿標(biāo)本，取不液化、液化10min、30min、60min以及鏡下精液液化時(shí)等幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)的精漿蛋白。方法：1．比較TCA/丙酮沉淀蛋白抽提法和超濾/變性蛋白抽提法提取蛋白的優(yōu)劣，選取和優(yōu)化提取效率較高的蛋白抽提法提取蛋白。2．二維電泳技術(shù)分離蛋白點(diǎn)并利用差異蛋白質(zhì)組學(xué)方法比較不同液化時(shí)間的精漿蛋白進(jìn)行差異分析。3．比較臨床檢測(cè)鏡下水平液化時(shí)的精漿蛋白二維電泳圖譜與各時(shí)段精漿蛋白二維電泳圖譜。4．MALDI-TOF質(zhì)譜鑒定所獲得的發(fā)生變化的蛋白點(diǎn)進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果：1．比較了兩種二維電泳蛋白提取方法，結(jié)果顯示TCA/丙... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

精液液化速率測(cè)定裝置

之內(nèi);(4)每管加入500pl沉淀液(preeipitant)，并短暫振蕩，室溫下孵育3分鐘;(5)每管加入500pl共沉淀液(eo一preeipitant)，并短暫振蕩混勻;(6)100009離心10分鐘，以沉淀蛋白質(zhì);(7)小心倒去管中的液體，避免將沉淀的蛋白質(zhì)打散;(8)再次短暫離心各管，將管壁上的殘余液體離心至管底，用移液器吸去底的液體，使沒(méi)有可見(jiàn)的液體殘留;(9)每管加入100pl銅離子溶液(coppersolution)和400pl純水，速振蕩，使沉淀的蛋白質(zhì)重新溶解;(10)每管加入lml顯色工作液，立即顛倒混勻;(11)在室溫下孵育20分鐘;(12)每管吸取200pl至96孔板中，以純水為對(duì)照，在波長(zhǎng)490nm處讀吸光值。該步驟應(yīng)在加入顯色工作液后40分鐘內(nèi)完成;(13)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算直線回歸方程，算出待測(cè)樣品的蛋白濃度。

圖3TCA抽提超濾/變性抽提Marker圖32.使用精液液化速率測(cè)定裝置測(cè)定所幾個(gè)時(shí)間段的精液液化率液為凝固狀態(tài)，無(wú)法通過(guò)濾過(guò)膜;其平均液化水瓶蓋在10分為50士5%，30分鐘時(shí)精液的液化率達(dá)到92%以上，還有少量過(guò)。}精液液化率一時(shí)間圖}

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人精液液化速率的簡(jiǎn)易定量測(cè)定術(shù)及其方法學(xué)評(píng)價(jià)[J]. 張智廣,韓咪莎,林蕓秀,江一平.  福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2006(06)
[2]利用H4和SAX-2蛋白質(zhì)芯片技術(shù)篩查少精子癥患者精漿標(biāo)志物[J]. 楊歡,張杰,張煒,龍文,張孝斌.  中華男科學(xué)雜志. 2006(01)



本文編號(hào)：3360124