發(fā)布時(shí)間：2024-11-02 00:48

　　目的:通過基因工程技術(shù)獲得重組幽門螺桿菌VacA毒性片段蛋白,為制備Hp感染的診斷試劑和研制疫苗提供有效抗原。以重組蛋白為抗原初步建立檢測(cè)血清VacA抗體間接ELISA法，為制備檢測(cè)Hp毒株感染的試劑盒奠定基礎(chǔ)。 方法：通過BLAST比較國內(nèi)Hp代表株的vacA基因毒性亞單位，找出高度同源性片段，按標(biāo)準(zhǔn)株AF050320 vacA基因序列設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)從Hp基因組中擴(kuò)增vacA基因毒性片段（v），插入原核表達(dá)載體pQE30上，轉(zhuǎn)化表達(dá)受體菌DH5α,SDS-PAGE分析表達(dá)情況，Western blot檢測(cè)其抗原性。Ni-NTA2+樹脂純化后，用重組蛋白免疫兔，Helico Blot試劑盒檢測(cè)兔血清VacA抗體以鑒定其免疫原性。并以純化的重組蛋白為抗原，建立檢測(cè)血清VacA抗體間接ELISA法，以Helico Blot試劑盒為標(biāo)準(zhǔn)，確定該方法的特異性與敏感性。 結(jié)果： 1.重組表達(dá)質(zhì)粒pQE30-V構(gòu)建成功,序列分析所得序列完整，與文獻(xiàn)報(bào)道的各中國菌株相比有高度同源性，而與標(biāo)準(zhǔn)株AF361700比較有1 .5%的bp及一個(gè)氨基酸發(fā)生變異；2....

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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第一部分 幽門螺桿菌vacA基因毒性片段的原核表達(dá)及初步應(yīng)用
    中文摘要
    英文摘要
    前言
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第二部分 幽門螺桿菌vacA毒性片段與hpaA融合基因的原核表達(dá)
    中文摘要
    英文摘要
    前言
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：4008758