目的：構(gòu)建HIV-1SF2株env基因C1區(qū)與C3區(qū)嵌合片段的克隆并在大腸桿中表達(dá)，以便對(duì)其表達(dá)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行進(jìn)一步研究。 方法：用DNAstar軟件輔助設(shè)計(jì)引物，以含有HIV-1SF2株前病毒基因組的9B_1R_6質(zhì)粒為模板，PCR法分別擴(kuò)增出env基因C1和C3段；兩個(gè)片段經(jīng)Kpn Ⅰ酶切、T_4連接酶連接和擴(kuò)增后，再將經(jīng)EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切的嵌合片段插入表達(dá)載pGEX-4T-2中，使插入片段位于谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)讀碼框架下游的多克隆酶切位點(diǎn)(MCS)，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-2/C1C3；重組質(zhì)粒經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定后，以TSS法轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH_(5α)，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白，最后經(jīng)SDS-PAG電泳分析表達(dá)蛋白圖譜。 結(jié)果：經(jīng)酶切和測(cè)序分析，插入片段讀碼框架正確，無(wú)堿基錯(cuò)配，表明成功構(gòu)建pGEX-4T-2/C1C3克�。恢亟M克隆在大腸桿菌DH_(5α)中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，高效地表達(dá)出相對(duì)分子質(zhì)量(M_r)為43×10~3的融合蛋白。 結(jié)論：重組質(zhì)粒pGEX-4T-2/C1C3的構(gòu)建和表達(dá)成功，為進(jìn)一步研究該表達(dá)蛋白的活性和HIV疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類(lèi)】：R346
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
小結(jié)
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
綜述
綜述參考文獻(xiàn)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 毛春生,金寧一,佟明華,郭志儒,殷震;人Ⅰ型免疫缺陷病毒gag-env嵌合基因在重組痘苗中的表達(dá)[J];生物工程進(jìn)展;2000年04期

2 劉巍峰,高東,王祖農(nóng),滕智平,岑山,曾毅;人免疫缺陷病毒1(HIV-1)膜蛋白基因片段在酵母中的克隆表達(dá)[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1999年01期

本文編號(hào)：2860406