目的 采用一種試驗(yàn)方法，經(jīng)PCR結(jié)合酶切同時(shí)利用內(nèi)參照一次區(qū)分四種皰疹病毒感染。 方法 利用DNAstar軟件包分別從HCMV，HSV-1，HSV-2和EBV的DNA聚合酶高保守基因區(qū)中設(shè)計(jì)一對(duì)共享序列引物，根據(jù)四種基因產(chǎn)物序列選擇Sma I和BamH I作為限制性內(nèi)切酶，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切，同時(shí)在相同條件下，利用β_2-MG作為內(nèi)參照，進(jìn)行反應(yīng)體系的內(nèi)部質(zhì)控，從而驗(yàn)證擴(kuò)增是否成功。做到在一個(gè)方法中，經(jīng)一次PCR擴(kuò)增并結(jié)合酶切即可區(qū)分四種病毒的感染。結(jié)果與細(xì)胞培養(yǎng)比較從而對(duì)該試驗(yàn)方法作出評(píng)估。 結(jié)果 β_2-MG及共享序列引物均出現(xiàn)擴(kuò)增條帶為陽(yáng)性，陽(yáng)性者經(jīng)Southern雜交證實(shí)特異性，再結(jié)合限制性酶切，電泳后四種病毒擴(kuò)增的產(chǎn)物分別是HCMV 594bp，HSV-1與HSV-2均為522bp，EBV 528bp.HSV-1被SmaI酶切形成478和44 bp兩個(gè)片段，但沒(méi)有BamH I酶切位點(diǎn)；HSV-2被BamH I酶切后形成224和298bp兩個(gè)片段，沒(méi)有SmaI酶切位點(diǎn)；EBV各有一個(gè)SmaI和BamH酶切位點(diǎn)，分別切成101與427，246和282bp四個(gè)片段；HCMV沒(méi)有兩種酶切位點(diǎn)。用此方法檢測(cè)臨床標(biāo)本與細(xì)胞培養(yǎng)比較后，得出3項(xiàng)重要的綜合評(píng)估指標(biāo)，及診斷敏感性、診斷特異性和診斷指數(shù)分別為100％，92.3％和192.3％，均在理想范圍內(nèi)。 結(jié)論 方法驗(yàn)證和評(píng)估指標(biāo)證實(shí)了該法的可行性，PCR結(jié)合酶切利用內(nèi)參照可作為一種簡(jiǎn)易，快速，敏感和特異的對(duì)四種皰疹病毒科病毒基因鑒別診斷方法，從而為臨床提供診斷參考。此法的建立對(duì)早期發(fā)現(xiàn)孕婦活動(dòng)性HSV-1或HCMV感染并及時(shí)予以特異治療，防止和減少先天性畸形以及優(yōu)生優(yōu)育實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)工作有重要意義。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：R346
【文章目錄】：
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料和儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 方法驗(yàn)證與實(shí)驗(yàn)質(zhì)量評(píng)估
3 結(jié)果
2-MG擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)果'>    3.1 β₂-MG擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)果
    3.2 PCR結(jié)合限制性內(nèi)切酶圖譜分析結(jié)果
    3.3 臨床標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果
    3.4 方法驗(yàn)證結(jié)果
    3.5 方法評(píng)估結(jié)果
4 討論
5 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
文獻(xiàn)綜述

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 鄭志明,MarieL.Landry,熊菊貞;Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒的某些生物學(xué)特征和用內(nèi)切酶分型的研究[J];病毒學(xué)報(bào);1986年01期

本文編號(hào)：2860351