目的:在原核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)沙眼衣原體CT135蛋白,并制備抗體,建立CT135蛋白免疫檢測(cè)方法。方法:將沙眼衣原體CT135基因（1083 bp）克隆入帶有His標(biāo)簽的pET-32a（+）載體中,通過(guò)NdeⅠ/XhoⅠ雙酶切構(gòu)建CT135全長(zhǎng)的重組質(zhì)粒WT,CT135基因N端逐漸縮短的重組質(zhì)粒MT1、MT2、MT3,以及CT135基因C端逐漸縮短的重組質(zhì)粒MT4、MT5、MT6,在大腸桿菌BL21（DE3）中重組表達(dá);用Ni2+-NTA親和層析柱純化重組蛋白,然后腹腔注射5周齡BALB/c雌鼠制備抗血清。結(jié)果:Western印跡使用高靈敏的二抗通過(guò)紅外掃描系統(tǒng)檢測(cè)到所有質(zhì)粒可表達(dá)重組蛋白,但考馬斯亮藍(lán)染色結(jié)果顯示只有MT6可高表達(dá)重組蛋白。制備純化了MT6重組蛋白,通過(guò)腹腔注射免疫法制備了小鼠抗MT6血清。結(jié)論:大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中,沙眼衣原體CT135蛋白的N端片段（1～374 bp）可以獲得高表達(dá)。小鼠抗MT6血清的制備為后期檢測(cè)沙眼衣原體CT135蛋白的表達(dá)奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：生物技術(shù)通訊. 2020,31(01)

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 引物設(shè)計(jì)與合成
    1.3 CT135全長(zhǎng)重組質(zhì)粒構(gòu)建
    1.4 CT135基因截短重組質(zhì)粒構(gòu)建
    1.5 蛋白表達(dá)
        1.5.1 蛋白取樣
        1.5.2 SDS-PAGE
        1.5.3 考馬斯亮藍(lán)染色和Western印跡
    1.6 抗體制備及檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
    2.2 蛋白表達(dá)
    2.3 多克隆抗體制備及檢測(cè)
3 討論



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