金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起化膿性感染和醫(yī)院感染的常見病原菌,由于細菌本身的進化和藥物的濫用導(dǎo)致其耐藥性逐漸增強,特別是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)嚴重影響人類健康,如何防治已成為全球關(guān)注的焦點。MRSA具有多重耐藥的特性,對目前絕大多數(shù)的抗菌藥耐藥,甚至對目前臨床最為有效的萬古霉素也開始出現(xiàn)耐藥,一旦MRSA發(fā)展到對萬古霉素普遍耐藥,MRSA感染患者將面臨無藥可治的危險境地,因此研究開發(fā)新的抗MRSA藥物具有重大意義。 中藥中蘊藏著多種有效成份,天然化合物極具結(jié)構(gòu)復(fù)雜性和多樣性,是開發(fā)新藥的一個巨大寶藏,也是我國新藥開發(fā)的一個優(yōu)勢所在。許多中藥都具有抗菌活性,如板藍根、穿心蓮、溪黃草、黃柏和魚腥草等,其單體成分如小檗堿、大黃素、穿心蓮內(nèi)酯和去氫貝母堿是其抗菌活性成分等。多種耐藥菌對中藥的抗菌物質(zhì)仍然敏感,提示中藥在耐藥菌株的治療方面也有明顯優(yōu)勢。 本課題對幾十種中草藥提取物和中藥單體進行了較為系統(tǒng)的研究,并對抗MRSA活性較強的中草藥和中藥單體進行了深入研究,旨在尋找到新的抗MRSA活性成分,為開發(fā)新的抗MRSA藥物提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。 課題分為三個部分： 一、對23種中草藥提取物的抗MRSA活性進行了篩選 采用96孔板法初步測定了23種中草藥水提物和醇提物的抗MRSA活性,從中篩選出8種具有較強抗MRSA活性的中草藥,分別為仙鶴草、蒲公英、夏枯草、半枝蓮、側(cè)柏葉、桑葉、木瓜、大血藤,且抑菌效果與濃度呈正相關(guān)性。進一步測定了這8種中草藥提取物對11株MRSA的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC),其中仙鶴草水提取物和醇提物抗MRSA活性最強,其MIC和MBC的生藥濃度均為6.25mg.mL-1。 二、對33種中藥單體的抗MRSA活性進行了研究 采用96孔板法測定了33種中藥單體對MRSA的抗菌活性,從中發(fā)現(xiàn)10種中藥單體對MRSA具有抑制活性,分別為花旗松素、黃芩素、二氫楊梅素、原花青素、沒食子酸、姜黃素、熊果酸、白秋李醇、水飛薊賓、蘆竹堿、楊梅苷,其MIC分別為50μg.mL-1、50gg.mL-1、1O0μg.mL1、1OOgg.mL"1、200gg.mL-1、400μg.mL-1、400μg.mL-1、400μg·mL-1、400μg.mL-1、400μg.mL-1、400μg.mL-1、800μg.mL-1。同時我們進一步研究了花旗松素、二輕楊梅素、原花青素3種抑菌作用相對較強的中藥單體對常見抗菌素的增敏作用,實驗結(jié)果結(jié)果表明這3種中藥單體對氧氟沙星、頭孢西丁鈉、氯霉素、頭孢唑啉鈉等4種常見抗菌素的抗MRSA活性無顯著的增敏作用。 三、仙鶴草提取物抗MRSA有效成分的深入研究 采用溶劑分離和柱層析相結(jié)合的方法對仙鶴草醇提物進行了分離,采用96孔板法逐步驗證分離物的活性,結(jié)果石油醚萃取部分經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚=7：3洗脫),分得5個有較強抗MRSA活性的成分。 通過實驗確證了水提物中抗MRSA活性物質(zhì)為鞣質(zhì),并對仙鶴草中鞣質(zhì)的提取和純化工藝進行了初步研究。 本課題從中草藥及中藥單體入手進行了較為系統(tǒng)的抗MRSA活性物質(zhì)篩選,得到了一些有價值的結(jié)果,為后續(xù)進一步的研究奠定了基礎(chǔ)。研究結(jié)果也表明,許多中草藥中的確含有抗MRSA活性物,但如何分離純化得到抗菌效果好的活性物質(zhì),是下一步研究的重點和難點。
【學(xué)位單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R378
【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
第二章 緒論
    2.1 研究目的和意義
    2.2 研究內(nèi)容和范圍
第三章 實驗材料與方法
    3.1. 實驗材料
        3.1.1 菌株來源
        3.1.2 中草藥、中藥單體來源
        3.1.3 單體、血平板、培養(yǎng)基及藥敏紙片來源
        3.1.4 常用試劑
        3.1.5 主要儀器
    3.2. 實驗方法
        3.2.1 實驗總體路線
        3.2.2 臨床菌株的鑒定
        3.2.3 23種中草藥對MRSA的抗菌活性研究
        3.2.4 33種中藥單體對MRSA的抗菌活性研究
        3.2.5 仙鶴草抗MRSA成分的初步研究
第四章 研究結(jié)果與分析
    4.1 臨床菌株菌株鑒定結(jié)果
    4.2 23種中草藥對MRSA的抗菌活性研究結(jié)果
    4.3 33種中藥單體對MRSA的抗菌活性研究結(jié)果
        4.3.1 33種單體的抑菌性分析
        4.3.2 中藥單體對抗菌藥物的增敏作用
        4.3.3 三種中藥單體對常見抗菌藥的增敏實驗結(jié)果
    4.4 仙鶴草醇提物中抗MRSA活性成分研究
    4.5 仙鶴草水提物中抗MRSA活性成分研究
    4.6 鞣質(zhì)提取工藝初步研究結(jié)果
        4.6.1 鞣質(zhì)含量測定方法的建立
        4.6.2 標(biāo)準曲線的制備
        4.6.3 鞣質(zhì)的提取及純化工藝的單因素考察
第五章 結(jié)論與建議
參考文獻
致謝
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本文編號：2828262