本文關(guān)鍵詞：DRG神經(jīng)元T型鈣通道調(diào)節(jié)機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：T型鈣通道又稱低電壓激活鈣通道(LVA),其組織分布廣泛,并且在機(jī)體生理和病理過(guò)程中,如神經(jīng)放電、疼痛、癌癥等都發(fā)揮重要的作用。因此,研究T型鈣通道調(diào)節(jié)機(jī)制有重要意義。然而,由于T型鈣通道特異性抑制劑的缺乏,致使T型鈣通道調(diào)節(jié)機(jī)制研究受限,發(fā)展緩慢。大量研究表明,許多激素和神經(jīng)遞質(zhì)都可通過(guò)激活G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)來(lái)調(diào)控T型鈣通道,但具體的調(diào)節(jié)機(jī)制尚不十分清楚。因此,本研究將圍繞激活GPCRs來(lái)探索T型鈣通道的調(diào)節(jié)機(jī)制。此外,還將研究硫化氫氣體對(duì)DRG神經(jīng)元中T型鈣電流的調(diào)節(jié)作用。第一部分G蛋白偶聯(lián)受體對(duì)DRG神經(jīng)元T型鈣通道的調(diào)節(jié)及分子機(jī)制的研究目的:研究激活GPCRs對(duì)T型鈣通道的作用并初步探索其調(diào)節(jié)的分子機(jī)制。包括:(1)μ型阿片受體激動(dòng)劑DAMGO對(duì)DRG神經(jīng)元中T型鈣電流的調(diào)節(jié)作用。(2)GABAB受體激動(dòng)劑baclofen對(duì)DRG神經(jīng)元中T型鈣電流及過(guò)表達(dá)在HEK293細(xì)胞中CaV3.2電流的調(diào)節(jié)作用。(3)研究baclofen調(diào)節(jié)T型鈣通道的分子機(jī)制。方法:利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)進(jìn)行研究。結(jié)果:(1)μ型阿片受體激動(dòng)劑DAMGO(250 n M)可逆性抑制DRG神經(jīng)元中T型(LVA)和高電壓激活鈣通道(HVA)鈣電流,抑制率分別為41.8±10.4%(n=3)和65.8±6.7%(n=8)。(2)DAMGO對(duì)HVA鈣電流的抑制作用成濃度依賴性(EC50=17.72±6.9 n M),并且G蛋白βγ亞基一定程度上參與了此抑制過(guò)程。(3)在一些DRG細(xì)胞中,DAMGO并不能夠抑制T型鈣電流。(4)GABAB受體激動(dòng)劑baclofen可逆性抑制DRG神經(jīng)元中LVA(T型)和HVA鈣電流,抑制率分別為22.53±2.05%(n=15)、31.90±3.11%(n=27)。并且此抑制作用可被400 ng/ml PTX部分阻斷(P0.001,n=9~11)。(5)GDP-beta-s能夠部分阻斷baclofen對(duì)HVA鈣電流的抑制作用(P0.05,n=16),但不能阻斷baclofen對(duì)LVA鈣電流的抑制作用(P0.05,n=6)。(6)DTT能夠部分恢復(fù)baclofen對(duì)LVA(T型)鈣電流的抑制作用(P0.01,n=6),但對(duì)baclofen引發(fā)的HVA鈣電流的抑制作用沒(méi)有影響(P0.05,n=14)。(7)GABAB受體激動(dòng)劑baclofen可逆性抑制與GABAB共表達(dá)在HEK293細(xì)胞中的CaV3.2電流,抑制率為24.73±1.11%(n=12),并且此抑制作用可被1 m M DTT部分洗脫(P0.001,n=7)結(jié)論:采用全細(xì)胞膜片鉗的方法發(fā)現(xiàn)激活μ型阿片受體和GABAB受體均可抑制T型鈣電流,但多數(shù)表達(dá)T型鈣通道的DRG神經(jīng)元并不表達(dá)μ受體。GABAB受體對(duì)T型鈣通道的調(diào)節(jié)是由Gαi/o型G蛋白介導(dǎo)的,并且還涉及氧化還原調(diào)節(jié)途徑。第二部分硫化氫對(duì)DRG神經(jīng)元T型鈣通道的調(diào)節(jié)作用目的:觀察硫化氫對(duì)DRG神經(jīng)元上T型鈣通道的調(diào)節(jié)作用方法:利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)進(jìn)行研究。結(jié)果:(1)Na HS在低濃度時(shí)能夠選擇性抑制DRG神經(jīng)元上的T型鈣電流,并且在100μM(n=5)、300μM(n=6)、1 m M(n=6)三個(gè)濃度梯度時(shí),對(duì)T型鈣電流的抑制率成濃度依賴性。Na HS對(duì)HVA鈣電流沒(méi)有作用(P0.05,n=11)。(2)Na HS在高濃度時(shí)(3 m M,10 m M)增大T型鈣電流。(3)高濃度Na HS對(duì)T型鈣電流的增大作用主要是Na+引起,而不是H2S本身的作用。將10 m M Na HS替換成10 m M Na Cl時(shí),后者同樣能夠增大T型鈣電流,雖然10 m M Na Cl的增大作用似乎略小與10 m M Na HS的增大作用(P=0.07,n=5)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,H2S能夠抑制DRG神經(jīng)元上的T型鈣電流,并且在較低濃度范圍內(nèi)抑制率呈濃度依賴性。高濃度的Na HS對(duì)T型鈣電流有增大作用,但并不是通過(guò)H2S的作用,而可能是其所含的Na+引起。
【關(guān)鍵詞】：T型鈣通道 CaV3.2 μ型阿片受體 GABAB受體 DRG神經(jīng)元 硫化氫 調(diào)節(jié)作用
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫(xiě)10-11
• 引言11-12
• 第一部分G蛋白偶聯(lián)受體對(duì)DRG神經(jīng)元T型鈣通道的調(diào)節(jié)及分子機(jī)制的研究12-35
• 前言12-14
• 材料與方法14-18
• 結(jié)果18-21
• 附圖21-30
• 討論30-31
• 小結(jié)31
• 參考文獻(xiàn)31-35
• 第二部分 硫化氫對(duì)DRG神經(jīng)元T型鈣通道的調(diào)節(jié)作用35-47
• 前言35-36
• 材料與方法36-38
• 結(jié)果38-40
• 附圖40-44
• 討論44
• 小結(jié)44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 結(jié)論47-48
• 綜述G蛋白偶聯(lián)受體對(duì)T型鈣通道調(diào)節(jié)機(jī)制的研究進(jìn)展48-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 致謝56-57
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷57

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  本文關(guān)鍵詞：DRG神經(jīng)元T型鈣通道調(diào)節(jié)機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：260111