目的本文旨在研究E3連接酶UHRF2與p21之間的相互作用關(guān)系,探索UHRF2在修復(fù)HEK293細(xì)胞中由羥基脲(HU)引起的DNA損傷的機(jī)制。方法本文通過Western blotting檢測過表達(dá)UHRF2對于p21表達(dá)量的調(diào)節(jié)作用;免疫熒光染色(IF)驗(yàn)證UHRF2與p21的亞細(xì)胞定位關(guān)系;免疫共沉淀(Co-IP)驗(yàn)證UHRF2與p21的相互結(jié)合關(guān)系以及探索其主要的結(jié)合結(jié)構(gòu)域;半衰期(Half-life)實(shí)驗(yàn)檢測UHRF2對p21半衰期的調(diào)節(jié)作用;體內(nèi)泛素化實(shí)驗(yàn)檢測UHRF2對p21的泛素化作用;Western blotting與免疫熒光染色相結(jié)合,探索UHRF2如何作用于p21來修復(fù)羥基脲引起的DNA損傷。結(jié)果Western blotting顯示,在HEK293、Hela、LO2、HepG2細(xì)胞中過表達(dá)UHRF2后,HEK293、Hela細(xì)胞中p21的表達(dá)量明顯降低,而LO2、HepG2細(xì)胞中p21的表達(dá)量未見有明顯差異;IF與Co-IP證實(shí),在HEK293、Hela細(xì)胞中,UHRF2與p21相互結(jié)合,且UHRF2的RING結(jié)構(gòu)域?yàn)橹饕慕Y(jié)合結(jié)構(gòu)域;Half-life實(shí)驗(yàn)證明,在H...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1不同細(xì)胞中過表達(dá)UHRF2對p21表達(dá)量的調(diào)控作用Fig1RegulatoryeffectoftheoverexpressionofUHRF2ontheexpressionofp21in

圖1不同細(xì)胞中過表達(dá)UHRF2對p21表達(dá)量的調(diào)控作用ulatoryeffectoftheoverexpressionofUHRF2ontheexpressidifferentcellsp21的亞細(xì)胞共定位、Hela細(xì)胞中UHRF2抑制....

圖2UHRF2與p21的亞細(xì)胞共定位Fig2Subcellularco-localizationofUHRF2andp21

圖2UHRF2與p21的亞細(xì)胞共定位Fig2Subcellularco-localizationofUHRF2andp21RF2與p21相互結(jié)合UHRF2與p21的亞細(xì)胞共定位的情況，我們需要了解UHRF2與p互結(jié)合。在HEK293、....

圖3UHRF2與p21相互結(jié)合

圖3UHRF2與p21相互結(jié)合Fig3UHRF2interactswithp212.4UHRF2與p21結(jié)合的主要結(jié)合結(jié)構(gòu)域的測定UHRF2具有多個(gè)結(jié)構(gòu)域，我們已經(jīng)證實(shí)UHRF2與p21相互結(jié)合，在此我們將探察UHRF2與p21相互結(jié)....

圖4UHRF2與p21的結(jié)合結(jié)構(gòu)域測定Fig4ThebindingdomaindetectionofUHRF2andp21

圖4UHRF2與p21的結(jié)合結(jié)構(gòu)域測定Fig4ThebindingdomaindetectionofUHRF2andp212調(diào)控p21的半衰期2可以抑制p21的表達(dá)已經(jīng)得到證實(shí)，這里我們繼續(xù)研究UHR蛋白的半衰期產(chǎn)生影響。將pCMV-....

本文編號：4003488