發(fā)布時(shí)間：2017-03-15 21:55

  本文關(guān)鍵詞：白楊素對慢性支氣管哮喘模型氣道炎癥和氣道重塑的影響以及機(jī)制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分白楊素對人氣道平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及機(jī)制研究目的:探索白楊素對人氣道平滑肌細(xì)胞(HASMCs)增殖、凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制。方法:采用cell counting kit-8(CCK-8)法測定白楊素對HASMCs以及血小板源性生長因子-BB(PDGF-BB)誘導(dǎo)的HASMCs增殖的影響;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測白楊素和PDGF-BB單獨(dú)或聯(lián)合作用對HASMCs的凋亡的影響;運(yùn)用Western Blot方法評價(jià)白楊素對PDGF-BB刺激后的HASMCs中ERK1/2磷酸化水平的影響。結(jié)果:白楊素(20μM,40μM)在24 h和48 h可以顯著抑制HASMCs的增殖(P0.05),且呈劑量和時(shí)間依賴性。PDGF-BB(10 ng/m L)可顯著促進(jìn)HASMCs增殖(P0.05),而白楊素(10μM,20μM,40μM)在24 h和48h均明顯抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的HASMCs增殖(P0.05),也呈現(xiàn)一定的劑量和時(shí)間依賴關(guān)系。PDGF-BB(10 ng/ml)和白楊素(20μM)對HASMCs凋亡無明顯影響。白楊素(20μM)對HASMCs中ERK1/2基礎(chǔ)狀態(tài)的磷酸化水平?jīng)]有明顯影響,但是可以明顯抑制PDGF-BB(10 ng/ml)誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化水平上升(P0.05)。結(jié)論:白楊素可以抑制基礎(chǔ)狀態(tài)以及PDGF-BB誘導(dǎo)下HASMCs的增殖;白楊素抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖可能是通過降低細(xì)胞內(nèi)ERK1/2磷酸化水平發(fā)揮作用。第二部分白楊素對慢性支氣管哮喘模型小鼠氣道炎癥和氣道重塑的影響目的:探索白楊素對慢性支氣管哮喘模型小鼠氣道炎癥和氣道重塑的影響及相關(guān)機(jī)制。方法:48只雌性BALB/c小鼠按照隨機(jī)原則分為對照組、哮喘組、地塞米松組和白楊素組,每組12只。第0、14天,腹腔注射卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏;第21天開始,1%OVA霧化30 min,每周3次,共8周。第21天開始,白楊素組小鼠給予白楊素(100 mg/kg)灌胃,每日一次,共8周;地塞米松組小鼠給予地塞米松(2 mg/kg)腹腔注射,每次霧化前30 min注射,每周三次,共8周。末次激發(fā)24 h后,使用小鼠肺功能儀進(jìn)行氣道反應(yīng)性測定。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細(xì)胞介素(IL)-4、IL-13及血清中總Ig E水平。取肺組織病理石蠟切片行蘇木精-伊紅(HE)染色,觀察肺組織炎癥浸潤情況,PAS染色觀察杯狀細(xì)胞增生程度,免疫組化半定量法檢測氣道α-平滑肌肌動蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)的表達(dá)。運(yùn)用Western Blot方法檢測小鼠肺組織中Akt、p-Akt、ERK、p-ERK蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:肺功能檢測發(fā)現(xiàn)各組小鼠的肺阻力(RL)基礎(chǔ)值無明顯差異;應(yīng)用氯化乙酰膽堿(Ach)進(jìn)行激發(fā)時(shí),隨濃度增加,對照組RL輕度增加,哮喘組RL顯著增加;當(dāng)氯化乙酰膽堿濃度在3.125 mg/m L及更高濃度時(shí),哮喘組氣道阻力較對照組明顯增加(P0.05);當(dāng)氯化乙酰膽堿劑量在6.25 mg/m L及更高濃度時(shí),地塞米松組和白楊素組氣道阻力較哮喘組顯著降低(P0.05)。哮喘組小鼠BALF中總炎癥細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞較對照組顯著增加(P0.05);地塞米松組和白楊素組小鼠BALF中總炎癥細(xì)胞數(shù)和各類炎癥細(xì)胞數(shù)均較哮喘組明顯減少(P0.05)。哮喘組小鼠BALF中IL-4和IL-13 較對照組明顯升高(P0.05);地塞米松組和白楊素組小鼠BALF中兩者水平均較哮喘組明顯降低(P0.05)。哮喘組總Ig E在血清中的表達(dá)較對照組明顯升高(P0.05),地塞米松組和白楊素組小鼠血清中總Ig E水平較哮喘組明顯下降(P0.05)。對照組小鼠氣道內(nèi)PAS陽性上皮細(xì)胞極少,哮喘組小鼠與對照組相比氣管壁PAS陽性上皮細(xì)胞明顯增加(P0.05);地塞米松組和白楊素組與哮喘組相比杯狀細(xì)胞增生顯著減輕(P0.05)。對照組小鼠氣道周圍α-SMA染色陽性面積很小,哮喘組小鼠與對照組相比,哮喘組小鼠肺組織α-SMA染色陽性面積明顯增加(P0.05);地塞米松組和白楊素組與哮喘組相比α-SMA染色陽性面積明顯減少(P0.05)。正常組小鼠肺組織中Akt、ERK1/2磷酸化水平較低,在OVA致敏和激發(fā)后,哮喘組Akt、ERK1/2磷酸化水平較正常組明顯增高(P0.05),地塞米松和白楊素可以顯著抑制肺組織中OVA誘導(dǎo)的Akt、ERK1/2磷酸化增加(P0.05),各組總Akt、ERK1/2無明顯變化。結(jié)論:白楊素可以在一定程度上抑制慢性支氣管哮喘模型小鼠的氣道高反應(yīng)性、氣道炎癥以及氣道重塑,這種作用可能與降低Akt和ERK1/2磷酸化水平有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：人氣道平滑肌細(xì)胞 白楊素 血小板源性生長因子 增殖 支氣管哮喘 白楊素 氣道高反應(yīng)性 氣道炎癥 氣道重塑
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25;R-332
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 引言12-14
• 第一部分 白楊素對人氣道平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及機(jī)制研究14-31
• 材料與方法14-25
• 結(jié)果25-29
• 討論29-31
• 第二部分 白楊素對慢性支氣管哮喘模型小鼠氣道炎癥和氣道重塑的影響31-51
• 材料與方法31-38
• 結(jié)果38-48
• 討論48-51
• 小結(jié)51-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 綜述59-69
• 參考文獻(xiàn)64-69
• 附錄69-72
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況72-73
• 致謝73

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