環(huán)境中的亞劑量抗生素誘導(dǎo)促進(jìn)了環(huán)境細(xì)菌發(fā)生耐藥性突變和抗生素抗性基因(ARGs)的水平遷移。這使得環(huán)境中耐藥性細(xì)菌的頻繁產(chǎn)生和快速擴(kuò)散。其中以針對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥性擴(kuò)散最受關(guān)注。廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL)和肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)是細(xì)菌抵抗β-內(nèi)酰胺類抗生素作用效果的重要方式。通過對(duì)位于長(zhǎng)江中下游的某水源性水庫中ESBL編碼基因的賦存特性進(jìn)行研究,課題組發(fā)現(xiàn)抗生素和可動(dòng)遺傳元件(MGEs)對(duì)ESBL編碼基因的分布起到顯著的影響:根據(jù)方差分解和普氏分析結(jié)果,兩者與ESBL編碼基因的分布具有極顯著的相關(guān)性,共可解釋65.10%的方差。然而共現(xiàn)性網(wǎng)絡(luò)分析表明以整合子為單位的轉(zhuǎn)化遷移并非ESBL編碼基因主要的基因水平遷移方式。ESBL編碼基因編碼于質(zhì)粒上,因此推測(cè)接合轉(zhuǎn)移是ESBL編碼基因發(fā)生基因水平遷移的重要途徑。課題組利用平板分離法從新加坡主要醫(yī)院的廢水中分離出可能具備ESBL和KPC合成能力的銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)菌株和大腸桿菌(E.coli)菌株,隨后使用標(biāo)準(zhǔn)16S rDNA測(cè)序法驗(yàn)證其菌種;使用Vitek^?2再次驗(yàn)證是否其具有...

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號(hào)對(duì)照表
第1章 緒論
    1.1 基因水平遷移簡(jiǎn)介
        1.1.1 什么是基因水平遷移
        1.1.2 HGT的幾種重要機(jī)理
    1.2 質(zhì)粒與接合轉(zhuǎn)移
        1.2.1 可動(dòng)遺傳元件與基因水平遷移
        1.2.2 質(zhì)粒
        1.2.3 接合轉(zhuǎn)移
    1.3 基因水平遷移與抗生素抗性基因擴(kuò)散
        1.3.1 抗生素抗性基因及其作用機(jī)理
        1.3.2 臨床環(huán)境與抗性基因水平遷移
    1.4 影響基因水平遷移的因素
        1.4.1 環(huán)境脅迫與SOS反應(yīng)
        1.4.2 低質(zhì)量濃度殺菌劑
    1.5 檢測(cè)接合轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)新方法
    1.6 研究背景和內(nèi)容
        1.6.1 研究背景
        1.6.2 研究?jī)?nèi)容
        1.6.3 技術(shù)路線圖
第2章 重要抗性基因在典型水源性水庫中的賦存特性
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 樣本采集
        2.2.2 DNA提取與定量
        2.2.3 數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 ESBL編碼基因的賦存特性與時(shí)空分布
        2.3.2 ESBL編碼基因與MGEs的共現(xiàn)性
    2.4 討論
        2.4.1 抗生素對(duì)ESBL編碼基因賦存特性的影響
        2.4.2 ESBL編碼基因參與基因水平遷移的途徑
    2.5 本章小結(jié)
第3章 耐β-內(nèi)酰胺細(xì)菌的分離與鑒定
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 水樣收集
        3.2.2 耐藥性細(xì)菌的收集與分離
        3.2.3 細(xì)菌DNA的提取及細(xì)菌種屬鑒定
        3.2.4 可合成ESBL和 KPC細(xì)菌的抗菌素藥敏測(cè)試
        3.2.5 ESBL和碳青霉烯酶編碼基因的定量檢驗(yàn)
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 分離菌株對(duì)重要抗生素的耐藥性
        3.3.2 分離菌株耐藥性的基因型驗(yàn)證
    3.4 本章小結(jié)
第4章 單一亞劑量抗生素對(duì)接合轉(zhuǎn)移的誘導(dǎo)特性
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 所用的化學(xué)藥劑
        4.2.2 供、受體菌株的預(yù)處理
        4.2.3 接合轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)與轉(zhuǎn)移頻率計(jì)算
        4.2.4 統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 無四環(huán)素、磺胺甲噁唑和頭孢他啶脅迫時(shí)的接合轉(zhuǎn)移頻率
        4.3.2 單一亞劑量抗生素脅迫對(duì)接合轉(zhuǎn)移影響
    4.4 討論
        4.4.1 供體菌種的選擇
        4.4.2 臨床廢水對(duì)環(huán)境微生物耐藥性擴(kuò)散的危害
        4.4.3 對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性的討論
    4.5 本章小結(jié)
第5章 多種亞劑量抗生素對(duì)接合轉(zhuǎn)移的協(xié)同影響
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 所用的化學(xué)藥劑
        5.2.2 誘導(dǎo)抗生素質(zhì)量濃度配比設(shè)計(jì)
        5.2.3 接合轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)與轉(zhuǎn)移頻率計(jì)算
        5.2.4 統(tǒng)計(jì)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 多種亞劑量抗生素對(duì)銅綠假單胞菌與受體菌株間接合轉(zhuǎn)移的協(xié)同影響
        5.3.2 多種亞劑量抗生素對(duì)大腸桿菌與受體菌株間接合轉(zhuǎn)移的協(xié)同影響
    5.4 討論
        5.4.1 ESBL編碼質(zhì)粒在亞劑量抗生素脅迫下的接合傳遞特點(diǎn)
        5.4.2 抗生素和抗性基因之間聯(lián)系的重新思考
    5.5 本章小結(jié)
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄 A ARGs引物序列表
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表或錄用的論文



本文編號(hào)：3835624