本文關(guān)鍵詞：能量代謝，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】： 理中丸是張仲景治療脾陽虛證的傳統(tǒng)名方,由干姜、人參、白術(shù)、炙甘草四味藥組成,功能溫中散寒,補(bǔ)氣健脾。干姜作為理中丸的君藥,在全方的配伍結(jié)構(gòu)中處于核心地位,在對脾胃虛寒證的治療中發(fā)揮著關(guān)鍵性作用。為了從實(shí)驗(yàn)的角度對君藥在方劑中核心配伍地位的內(nèi)涵進(jìn)行揭示,本實(shí)驗(yàn)以理中丸中的君藥干姜作為研究切入點(diǎn),借助中醫(yī)脾陽虛證候模型,對干姜及其不同有效部位對理中丸調(diào)節(jié)消化吸收及能量代謝功能的影響進(jìn)行了比較研究,從藥味和化學(xué)成分群兩個(gè)層次的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的角度,對君藥干姜決定理中丸主要功效的核心地位進(jìn)行了揭示。 全文共分為脾陽虛模型的制備和干姜及其成分對理中丸藥效學(xué)影響的比較兩大部分。 1“石膏-知母”復(fù)合法脾陽虛模型的制備 1.1目的 以清熱瀉火藥石膏-知母代替常用的大黃、番瀉葉類苦寒瀉下藥,并結(jié)合饑飽失常、勞倦過度的方法進(jìn)行造模,以期建立更符合中醫(yī)“寒涼傷陽、饑飽傷氣和勞倦傷脾”致病思路的中醫(yī)脾陽虛證候模型。 1.2方法 模型動(dòng)物隔日足量喂食,每日在25℃水中游泳,直至大鼠連續(xù)三次吐泡下沉,或沉入水底,3秒內(nèi)不能自行浮出水面,并以三種不同給藥頻率灌胃給予石膏一知母煎液,比較石膏-知母不同給藥方法對制備脾陽虛模型的影響。方法1:造模1-6日隔日灌胃4℃的石膏-知母煎液(濃度為4:1,下同),劑量為10ml/kg(下同);造模7-12日,每同灌胃石膏-知母煎液,自然恢復(fù)15天。方法2:隔日灌胃給予4℃的石膏-知母煎液,劑量為10ml/kg,連續(xù)20天,自然恢復(fù)12天。方法3:每R灌胃給予4℃的石膏一知母煎液,2ml/只,連續(xù)12天,自然恢復(fù)9天。觀察造模動(dòng)物的一般生物學(xué)特征改變,檢測體溫、體重、食量的變化,以及血中D-木糖、6AS、MLT含量和腸組織中N0水平等與消化吸收功能及能量代謝相關(guān)指標(biāo)。 1.3結(jié)果 三種造模方法均能引起造模動(dòng)物一般生物學(xué)特征的改變,出現(xiàn)腹瀉、倦怠、體溫下降、體重減輕等表現(xiàn)。其中方法2的影響最小,模型動(dòng)物恢復(fù)較快;方法1和方法3都能造成模型動(dòng)物一般生物學(xué)特征的明顯改變,且以方法3引起的模型癥狀變化更加明顯且穩(wěn)定。在消化吸收及能量代謝的相關(guān)指標(biāo)方面,造模方法3能使血中GAS、MLT、D-木糖含量降至正常水平以下,使腸運(yùn)動(dòng)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)NO的水平降低,體溫減低明顯、食量減低、體重增長減慢。造模方法1對消化吸收相關(guān)藥理指標(biāo)的改變與造模方法3的影響相似,但對模型動(dòng)物的體重和食量的影響不明顯;造模方法2除能使模型動(dòng)物的體重減輕外,對其他各指標(biāo)均無顯著影響。 1.4結(jié)論 對比實(shí)驗(yàn)采用的三種石膏-知母的給藥方法,方法3的造模效果最為顯著和穩(wěn)定,即以每日灌胃給藥,連續(xù)12天,恢復(fù)9天,是本實(shí)驗(yàn)證實(shí)的最有效的脾陽虛證候模型制備方法。 2干姜及其不同有效部位對理中丸消化吸收功能及代謝的影響 2.1目的 通過對理中丸中君藥干姜,以及干姜中揮發(fā)性成分和水溶性成分對理中丸主要功效影響的研究,從藥味和化學(xué)成分群兩個(gè)層次,證實(shí)君藥干姜及干姜中的主要活性成分群對理中丸整體功效的決定性影響,以初步揭示理中丸中君藥核心地位的藥理學(xué)和化學(xué)內(nèi)涵。 2.2方法 采用石膏-知母復(fù)合造模法制備大鼠脾陽虛證候模型,造模期為14天1;治療期間各給藥組分別給予治療藥物,連續(xù)給藥8天。供試藥物分別為理中丸、四君子湯供試液,干姜水溶性成分和不同劑量揮發(fā)性成分(大、中、小劑量比為2:1:0.5)分別代替干姜原藥材配伍入理中丸,組成的干姜水溶性成分理中配方和大、中、小劑量干姜揮發(fā)性成分理中配方供試液,其中揮發(fā)性成分的中劑量相當(dāng)于干姜的常規(guī)劑量。造模及治療過程中,對各組大鼠的體溫、體重、食量進(jìn)行測定;治療結(jié)束時(shí),測定下列兩組指標(biāo)。與消化吸收有關(guān)的指標(biāo)有:胃的排空率和腸推進(jìn)率;血中D-木糖(D-xylose)、胃泌素(GAS)、胃動(dòng)素(MLT)含量,膽堿酯酶(CHE)活性,胃組織中H~+-K~+-ATP酶活性,空腸組織中NO含量;腸中血管活性腸肽(VIP)和腸間質(zhì)細(xì)胞(ICC)含量(免疫組化法);測定腸肌間神經(jīng)叢中膽堿能神經(jīng)(AchE陽性神經(jīng))和氮能神經(jīng)(NOS陽性神經(jīng))的分布(組織化學(xué)法)及累計(jì)光密度;觀察胃、腸的病理改變,以及干姜揮發(fā)性成分理中配方中、大劑量組大鼠肝的病理改變。與能量代謝相關(guān)的指標(biāo)有:空腹血糖值,血中肌酸激酶(CK)活性、乳酸(LD)水平;胃、空腸、骨骼肌線粒體ATP酶活性;肌糖元的含量;下丘腦中5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)含量。 2.3結(jié)果 為了對不同層次的研究問題分別進(jìn)行說明,研究結(jié)果分為三個(gè)層次進(jìn)行表述。 2.3.1理中丸與四君子湯對脾陽虛證消化吸收功能和能量代謝的影響差異 在胃的運(yùn)動(dòng)和消化功能方面,四君子湯可提高血中MLT、GAS水平,增加胃的排空率,但作用明顯弱于理中丸。四君子湯對正常的胃H~+-K~+-ATP酶活性有明顯抑制作用,但理中丸作用不明顯。在腸的消化吸收功能方面,四君子湯和理中丸均可降低腸推進(jìn)率,且無明顯差異。四君子湯主要是通過降低血中CHE活性水平引起的,對NO無明顯影響。雖然四君子湯對提高模型大鼠D-木糖吸收率和增加食量方面的作用優(yōu)于理中丸,但兩方在增加模型動(dòng)物體重方面的作用無顯著差異。并且對胃腸病理形態(tài)的觀察顯示,四君子湯對胃、腸粘膜的保護(hù)作用較理中丸弱。 在對能量代謝的影響方面,理中丸能改善造模引起的CK活性降低、LD和肌糖元含量升高;降低下丘腦中5-HIAA含量,升高體溫。理中丸對造模引起的代償性血糖升高、骨骼肌線粒體中Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性增強(qiáng)均有明顯的抑制作用。理中丸除了對胃組織線粒體中的Na~+-K~+-ATP酶的活性有所降低外,對胃腸線粒體中的其他ATP酶活性均無明顯影響。 而四君子湯不能糾正造模引起的大鼠體溫降低,對下丘腦中5-HIAA的含量沒有明顯影響;除了對血中CK的活性降低和對胃線粒體中ATP酶的抑制作用強(qiáng)于理中丸外,對其他指標(biāo)的影響均弱于理中丸。 2.3.2干姜揮發(fā)性成分和水溶性成分對理中丸調(diào)節(jié)脾陽虛模型消化吸收功能和能量代謝作用的影響 在對消化吸收功能的影響方面,干姜揮發(fā)性成分理中配方和干姜水溶性成分理中配方均能提高脾陽虛模型血中GAS和MLT水平,干姜揮發(fā)性成分理中配方的作用優(yōu)于干姜水溶性成分理中配方,也優(yōu)于理中丸原方;但兩者在增加胃排空率方面的作用無明顯差異。干姜水溶性成分理中配方對血中CHE的抑制作用較強(qiáng),同時(shí)能升高模型大鼠腸組織中降低的NO水平,降低模型大鼠腸中ICC數(shù)量,但對腸中VIP的含量無明顯影響。干姜揮發(fā)性成分理中配方對血中CHE活性的抑制作用弱于干姜水溶性成分理中配方,也不能提高空腸中抑制性神經(jīng)遞質(zhì)NO的釋放,且對腸組織VIP的含量也無明顯影響,僅在抑制腸中ICC的數(shù)量方面作用顯著。然而比較干姜揮發(fā)性成分理中配方、干姜水溶性成分理中配方和理中丸原方對大鼠小腸推進(jìn)率的抑制作用,三者并未顯示出明顯差異。此外,干姜揮發(fā)性成分理中配方對模型大鼠D-木糖的吸收率的增加和促進(jìn)體重增長方面的作用,優(yōu)于干姜水溶性成分理中配方和理中丸。在對胃腸組織形態(tài)的保護(hù)方面,干姜揮發(fā)性成分理中配方的作用更優(yōu)。 在對能量代謝的影響方面,干姜揮發(fā)性成分理中配方能有效降低下丘腦5-HIAA水平,體溫明顯升高;同時(shí)能有效降低血中CK的活性和LD的含量,并能抑制造模引起的骨骼肌ATP酶活性及血糖的代償性增高,使之恢復(fù)正常水平。干姜水溶性成分理中配方對下丘腦中5-HIAA不但沒有降低作用,反而使其含量升高,對造模引起的體溫降低無明顯影響。除了對骨骼肌中ATP酶的抑制作用較為強(qiáng)烈外,干姜水溶性成分理中配方對其他各指標(biāo)的改善作用均弱于干姜揮發(fā)性成分理中配方。 2.3.3不同劑量干姜揮發(fā)性成分對理中丸調(diào)節(jié)脾陽虛模型消化吸收功能和能量代謝的影響 干姜揮發(fā)性成分中劑量配伍能顯著提高血中GAS和MLT水平,使之達(dá)到正常值以上,并能顯著提高胃排空率。干姜揮發(fā)性成分大、小劑量理中配方雖也具有相似的作用,但作用較干姜揮發(fā)性成分中劑量配方弱。各干姜揮發(fā)性成分理中配方主要通過影響膽堿能神經(jīng)功能和空腸ICC數(shù)量來抑制腸的運(yùn)動(dòng)功能。干姜揮發(fā)性成分中劑量配方對ICC數(shù)量的減少作用最強(qiáng),大劑量配方對抑制血中CHE活性的作用最突出。對腸中NO含量的影響中,除干姜揮發(fā)性成分小劑量能使其含量上升外,姜醚中、大劑量表現(xiàn)為降低的作用,但中劑量配方能使肌間神經(jīng)叢中氮能神經(jīng)的累積光密度值(IOD)增高。從對改善腸推進(jìn)率的作用來看,大、中、小劑量的干姜揮發(fā)性成分理中配方間沒有明顯差異。但對胃腸組織形態(tài)的保護(hù)方面,中劑量配方的作用更為顯著。 對能量代謝功能的影響方面,中劑量和大劑量干姜揮發(fā)性成分理中配方可有效降低下丘腦5-HIAA水平,并使模型大鼠體溫上升至正常水平;小劑量干姜揮發(fā)性成分理中配方雖然對下丘腦5-HIAA水平也有降低作用,但對造模后大鼠的體溫降低未顯示出明顯改善作用。三劑量理中配方均能有效降低血中CK活性和LD水平,以及肌糖元含量,其中中劑量和大劑量干姜揮發(fā)性成分理中配方的作用更加明顯。對于造模引起的血糖及骨骼肌線粒體中Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性代償性增高,三劑量理中配方均有降低作用,中劑量配方對血糖的降低作用最突出,而小劑量配方對ATP酶的影響較明顯。 實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),大劑量干姜揮發(fā)性成分理中配方能導(dǎo)致血中GOT活性有所升高,使肝小葉中央靜脈周圍肝組織出現(xiàn)少量的細(xì)胞壞死,提示干姜揮發(fā)性成分配伍劑量過大時(shí),有可能引起肝臟的損害。而小劑量和中劑量干姜揮發(fā)性成分配伍對肝臟的功能未見損害作用。 2.4結(jié)論 在對脾陽虛證模型的治療中,理中丸所代表的溫陽健脾法是針對脾陽虛證進(jìn)行治療的基本立法,干姜是理中丸實(shí)現(xiàn)溫陽散寒作用的核心藥物;而在干姜所含的揮發(fā)性成分和水溶性成分中,干姜的揮發(fā)性成分成分對理中丸功效的影響最為突出,對理中丸調(diào)節(jié)脾陽虛證模型消化吸收功能和能量代謝具有決定性作用。隨著干姜揮發(fā)性成分在理中配方中配伍劑量的增加,理中配方的功效的作用強(qiáng)度發(fā)生改變,以揮發(fā)性成分中、大劑量配伍時(shí),其療效顯著提高,但大劑量干姜揮發(fā)性成分理中配方時(shí),存在對模型動(dòng)物的肝臟產(chǎn)生損害傾向,因此從本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果判斷,干姜揮發(fā)性成分以中劑量配伍時(shí),其療效最佳。 通過上述的研究可以證明,君藥干姜在理中丸配伍結(jié)構(gòu)中的核心地位和功效上的決定性作用并不是方劑學(xué)理論中純粹理論層面上的假設(shè),而是具有重要的事實(shí)基礎(chǔ)的。對方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的揭示,又會(huì)對方劑配伍理論的認(rèn)識(shí)產(chǎn)生至關(guān)重要的影響。

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