酮病是圍產(chǎn)期奶牛泌乳初期常見的糖脂代謝障礙性疾病�；寂R床酮病的奶牛血漿非酯化脂肪酸（NEFA）與酮體濃度顯著升高,并表現(xiàn)出乳蛋白率降低、乳脂率升高等特征。血液中高濃度的NEFA能夠被奶牛乳腺組織吸收,并用于合成乳脂。乳蛋白與乳脂的合成受到諸多因素的影響。其中JAK2/STAT5與mTOR信號(hào)通路是調(diào)節(jié)乳蛋白合成的核心途徑;誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的DFF45樣因子A（CIDEA）是脂滴相關(guān)蛋白,與脂質(zhì)代謝密切相關(guān)。已有研究表明,在小鼠乳腺組織中,CIDEA參與乳脂的合成與分泌,并直接影響新生小鼠存活率,且在泌乳奶牛乳腺組織中高表達(dá)。但臨床酮病奶牛高NEFA是否參與以及如何調(diào)控乳腺組織乳蛋白和乳脂的合成尚不清楚。因此,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)采集健康與臨床酮病奶牛乳腺組織,體外分離培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞（BMEC）并添加不同濃度NEFA,研究高濃度NEFA對(duì)乳蛋白和乳脂合成與分泌的影響及機(jī)制。采集健康奶牛與臨床酮病奶牛的血液和乳汁樣本,檢測(cè)血清代謝指標(biāo)并進(jìn)行乳成分分析。結(jié)果表明,臨床酮病奶牛血液中NEFA、乳中乳脂率顯著高于健康奶牛,乳蛋白率顯著低于健康奶牛。為進(jìn)一步研究高濃度NEFA分別對(duì)乳蛋白與乳脂合成的影響... 

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脂肪組織中脂肪酸(Fa)的動(dòng)態(tài)循環(huán)

第二篇研究?jī)?nèi)容第2章高濃度NEFA對(duì)臨床酮病奶牛乳蛋白合成的影響35圖2.1臨床酮病對(duì)奶牛乳腺中β-casein表達(dá)水平、JAK2/STAT5及mTOR信號(hào)通路重要分子磷酸化水平的影響。（A）β-casein、p-mTOR、mTOR、p-S6K1、S6K1、p-JAK2、JAK2、p-STAT5、STAT5、β-actin的蛋白Westernblotting結(jié)果。（B）β-casein的相對(duì)蛋白到達(dá)水平。（C-F）p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1、p-JAK2/JAK2、p-STAT5/STAT5蛋白的磷酸化比值。數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM（n=15）。Fig.2.1Theeffectofclinicalketosisontheabundanceofβ-casein,thephosphorylationlevelofJAK2/STAT5andmTORsignalingpathwayonthebovinemammarygland.(A)Westernblottinganalysisofβ-casein,p-mTOR,mTOR,p-S6K1,S6K1p-JAK2,JAK2,p-STAT5andSTAT5.(B)Relativeproteinabundanceofβ-casein.(C-F)Theratioofp-mTOR/mTOR,p-S6K1/S6K1,p-JAK2/JAK2andp-STAT5/STAT5inBMEC.Thedatawereexpressedasthemean±SEM(n=15pergroup).

第二篇研究?jī)?nèi)容第2章高濃度NEFA對(duì)臨床酮病奶牛乳蛋白合成的影響362.3.2免疫熒光（IF）鑒定BMEC利用免疫熒光（IF）對(duì)分離培養(yǎng)的BMEC中的骨架蛋白CK-18的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果如圖2.2顯示，純化后的細(xì)胞均高表達(dá)CK-18，表明分離純化后用于實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞為BMEC。圖2.2免疫熒光檢測(cè)BMEC中CK-18的表達(dá)（bar=10μm）。藍(lán)光熒光部分為DAPI染色的細(xì)胞核，綠光熒光部分為染色的CK-18。Fig.2.2IFdetectstheexpressionofCK-18inBMEC（bar=10μm）。ThebluefluorescentpartisDAPIstainednucleusandthegreenfluorescentpartisstainedCK-18.2.3.3不同濃度NEFA對(duì)BMEC中β-casein的mRNA和蛋白表達(dá)量的影響在BMEC中添加不同濃度的NEFA，通過(guò)qRT-PCR和WesternBlotting技術(shù)，檢測(cè)了BMEC中β-casein的mRNA豐度和蛋白表達(dá)量。結(jié)果顯示，BMEC中β-casein的表達(dá)水平隨添加的NEFA濃度的增加而減少（P<0.01,圖2.3）。說(shuō)明高濃度NEFA能夠抑制BMEC中β-casein的表達(dá)。圖2.3NEFA抑制BMEC中β-casein的表達(dá)。BMEC添加0,0.3,0.6,or1.2mM的NEFA處理24h。（A）β-casein蛋白的Westernblotting結(jié)果。（B）β-casein的相對(duì)蛋白表達(dá)水平。（C）β-caseinmRNA表達(dá)水平。Fig.2.3NEFAnegativelyregulatestheabundanceofβ-caseininBMEC.Thecellswereculturedwith0,0.3,0.6,or1.2mMNEFAfor24h.(A)Westernblottinganalysisofβ-caseininBMEC.(B)Relativeproteinabundanceofβ-casein.(C)RelativemRNAabundanceofβ-caseininBMEC.

【參考文獻(xiàn)】：
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