發(fā)布時間：2021-08-10 12:02

　　家蠶核型多角體病,又名家蠶血液型膿病,一直是蠶業(yè)生產(chǎn)中危害最為嚴重的病毒性傳染病,及時采取有效的防控措施,是防止群體內(nèi)蠶病大流行或避免蠶病爆發(fā)造成經(jīng)濟損失的有效途徑。傳統(tǒng)家蠶核型多角體病毒（Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus,BmNPV）檢測手段基本上都有一定的缺陷,研究建立一種快速、特異、簡便的高靈敏BmNPV檢測技術,減少家蠶核型多角體病對蠶繭生產(chǎn)造成的經(jīng)濟損失,保持蠶桑生產(chǎn)的可持續(xù)健康穩(wěn)定發(fā)展具有重要意義。電化學免疫傳感器具有操作簡便、檢測限低、精密度高、原料低廉、反應時間短、可自動化操作等優(yōu)點,被成功應用于臨床醫(yī)學診斷、食品工業(yè)質(zhì)檢、環(huán)境成分分析、動物病原微生物檢測等領域。本研究通過利用混合自組裝膜修飾金電極,構建家蠶核型多角體電化學免疫傳感器,建立家蠶核型多角體病毒電化學免疫傳感器快速檢測技術,并且應用到實際樣品檢測中。主要研究結果如下:1.對兩種混合自組裝膜進行電化學表征以及檢測抗原效果的研究,結果表明80%的MUA/ME混合自組裝膜修飾電極效果最佳。將預處理后的工作電極置于80%的MUA/ME混合溶液中進行自組裝24 h,置入ED... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

BmNPV電化學免疫傳感器的制備及檢測原理

基于電化學免疫傳感技術的家蠶核型多角體病毒檢測方法研究183結果與分析3.1家蠶核型多角體病毒包涵體的分離純化經(jīng)粗提、45%蔗糖濃度梯度離心純化后所得到的家蠶核型多角體病毒包涵體為白色懸濁液（圖3-1），在顯微鏡下可以觀察到其大小均一、具有較強折光性的病毒多角體（圖3-2）。3.2BmNPV多角體蛋白濃度的測定3.2.1標椎曲線的制作將配置好不同濃度的BSA標準溶液經(jīng)分光光度計測定其吸光值，結果見表3-1。表3-1不同濃度標準蛋白質(zhì)的吸光度Table3-1Absorbanceofdifferentconcentrationsofstandardprotein試管編號Testtubenumber012345678蛋白質(zhì)（mg/mL）Protein00.10.20.30.40.50.60.70.8吸光度值Absorbance00.0530.1160.1540.1840.2320.2530.3100.343根據(jù)表3-1中數(shù)據(jù)，以牛血清白蛋白含量（mg）為橫坐標，以吸光值為縱坐標，繪制蛋白質(zhì)濃度-吸光度標準曲線，如圖3-3。分析其數(shù)據(jù)可得到線性回歸方程為Y=0.4526X+0.0046，R2=0.9916，表明蛋白濃度標準曲線擬合度良好，可用于BmNPV多角體蛋白濃度的測定。圖3-1家蠶核型多角體病毒包涵體懸濁液Fig.3-1SuspensionofOcclusionbodiesofBmNPV圖3-2家蠶核型多角體病毒包涵體Fig.3-2OcclusionbodiesofBmNPV

基于電化學免疫傳感技術的家蠶核型多角體病毒檢測方法研究183結果與分析3.1家蠶核型多角體病毒包涵體的分離純化經(jīng)粗提、45%蔗糖濃度梯度離心純化后所得到的家蠶核型多角體病毒包涵體為白色懸濁液（圖3-1），在顯微鏡下可以觀察到其大小均一、具有較強折光性的病毒多角體（圖3-2）。3.2BmNPV多角體蛋白濃度的測定3.2.1標椎曲線的制作將配置好不同濃度的BSA標準溶液經(jīng)分光光度計測定其吸光值，結果見表3-1。表3-1不同濃度標準蛋白質(zhì)的吸光度Table3-1Absorbanceofdifferentconcentrationsofstandardprotein試管編號Testtubenumber012345678蛋白質(zhì)（mg/mL）Protein00.10.20.30.40.50.60.70.8吸光度值Absorbance00.0530.1160.1540.1840.2320.2530.3100.343根據(jù)表3-1中數(shù)據(jù)，以牛血清白蛋白含量（mg）為橫坐標，以吸光值為縱坐標，繪制蛋白質(zhì)濃度-吸光度標準曲線，如圖3-3。分析其數(shù)據(jù)可得到線性回歸方程為Y=0.4526X+0.0046，R2=0.9916，表明蛋白濃度標準曲線擬合度良好，可用于BmNPV多角體蛋白濃度的測定。圖3-1家蠶核型多角體病毒包涵體懸濁液Fig.3-1SuspensionofOcclusionbodiesofBmNPV圖3-2家蠶核型多角體病毒包涵體Fig.3-2OcclusionbodiesofBmNPV

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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[2]基于復合納米材料組裝的信號增強的電化學免疫傳感器的研究[D]. 卓穎.西南大學 2009

碩士論文
[1]基于功能化石墨烯復合材料檢測腫瘤標志物的電化學免疫傳感研究[D]. 賈海燕.江西科技師范大學 2019
[2]基于納米材料的腫瘤標志物檢測信號增強電化學傳感器研究[D]. 賴玉璇.湖南工業(yè)大學 2019
[3]電化學免疫傳感器快速檢測甲型流感病毒的研究[D]. 林睿.中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院 2014
[4]家蠶核型多角體病毒在家蠶中的垂直傳播及檢測技術研究[D]. 張彥.安徽農(nóng)業(yè)大學 2014
[5]硫醇分子自組裝膜的制備表征及其應用研究[D]. 王亞君.太原理工大學 2014
[6]基于納米氧化物和碳納米管的免疫傳感器的研究[D]. 凌書娟.西南大學 2009
[7]云南省家蠶主要病毒病的病原鑒定和PCR檢測技術的研究[D]. 董占鵬.西南農(nóng)業(yè)大學 2002



本文編號：3334027