本文關鍵詞：重組菌絲霉素抗菌肽的發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化及其在斷奶仔豬上的應用效果研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：菌絲霉素是一種從腐生子囊菌中分離出的防御素類抗菌肽,具有抗革蘭氏陽性菌的作用。為實現其廉價生產,本實驗室在前期研究中構建了重組菌絲霉素基因工程菌(PPle)；為進一步提高其表達水平,本研究利用30L發(fā)酵罐篩選了最適培養(yǎng)基；在此基礎上,評價了重組抗菌肽在斷奶仔豬上的應用效果,以期為菌絲霉素抗菌肽在飼料工業(yè)中的推廣應用積累資料。主要研究內容及結果如下：試驗一：重組菌絲霉素抗菌肽發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化及其體外抑菌效果的研究試驗利用30L發(fā)酵罐對工程菌PPle進行液體發(fā)酵,采用分批-補料式發(fā)酵工藝,比較甘油低鹽、甘油基礎鹽和可溶性淀粉基礎鹽三種不同培養(yǎng)基對重組菌絲霉素抗菌肽分泌表達的影響。采用考馬斯亮藍法檢測發(fā)酵上清液總蛋白,通過SDS-PAGE檢測重組抗菌肽的表達形式,結合平板抑菌試驗考察重組抗菌肽體外穩(wěn)定性和抑菌效果。結果表明：發(fā)酵到114h,甘油低鹽組、甘油基礎鹽組和可溶性淀粉基礎鹽組菌體濕重達到最高,分別為450g/L,402g/L，277g/L。發(fā)酵114h,測得甘油低鹽組發(fā)酵上清液蛋白總濃度：0.375g/L；甘油基礎鹽組：3.941g/L；可溶性淀粉基礎鹽組：5.63g/L。體外抑菌結果顯示：通過酸、胃蛋白酶和胰蛋白酶處理之后,重組菌絲霉素抗菌肽對金黃色葡萄球菌有較強抑菌效果。上述結果表明：通過優(yōu)化培養(yǎng)基,提高了重組抗菌肽的表達量,且其穩(wěn)定性好,對金黃色葡萄球菌抑菌效果強,最適培養(yǎng)基為甘油基礎鹽培養(yǎng)基。試驗二：重組菌絲霉素抗菌肽在斷奶仔豬上的應用效果研究本試驗考察了重組菌絲霉素抗菌肽(Ple)對斷奶仔豬生長性能、免疫功能和腸道健康的影響。試驗選用30頭24日齡健康DLY斷奶仔豬,按體重一致原則分配至5個組：對照組(CON：無抗飼糧),硫酸黏菌素組(CS：飼糧添加0.3%硫酸粘桿菌素),抗菌肽組(AP：飼糧添加0.2%Ple),微生態(tài)制劑組(PB：飼糧添加0.1%微生態(tài)制劑)和聯合應用組(PPB：0.2% Ple+0.1%微生態(tài)制劑),試驗期為21d。結果表明：與對照組相比,CS組和AP組顯著增加了ADFI和ADG,顯著降低了F/G(P0.05),有降低腹瀉率的趨勢(P=0.065),且極顯著降低了腹瀉指數(P0.01),分別降低了91%和88%。與對照組相比,其余四個處理有提高能量和干物質表觀消化率的趨勢(P0.1)。PB組磷的養(yǎng)分表觀消化率極顯著高于其余四個處理(P0.01)。與對照組相比,CS組、AP組和PPB組的十二指腸黏膜麥芽糖酶、蔗糖酶酶活,空腸黏膜麥芽糖酶、蔗糖酶和乳糖酶酶活均得到了顯著提高(P0.01)。AP組和PPB組對血清D-木糖的吸收極顯著高于其余三個處理組(P0.01)。與其余各組相比,AP組顯著提高了回腸食糜雙歧桿菌的含量(P0.05)。PB組回腸食糜乳酸桿菌含量顯著高于對照組(P0.05),但與其他處理組差異不顯著。PB組盲腸食糜中大腸桿菌含量顯著高于CS組和AP組(P0.05),其中PPle組最低。與其余各組相比,CS組有降低結腸食糜微生物中大腸桿菌含量的趨勢(0.01P0.05)。與對照組相比,AP組、PB組和PPB組極顯著降低了結腸中食糜的pH值(P0.01)。與對照組相比,其余四個處理極顯著增加了十二指腸絨毛長度、絨隱比、空腸絨毛長度和回腸絨毛長度、絨隱比,降低了回腸隱窩深度(P0.01)。與對照組相比,CS組、AP組和PPB組極顯著提高了空腸黏膜sIgA分泌水平(P0.01)。與其余四個處理相比,對照組極顯著提高了IgG分泌量(P0.01)。綜上所述,重組菌絲霉素抗菌肽最適發(fā)酵培養(yǎng)基是甘油基礎鹽培養(yǎng)基,發(fā)酵上清液總蛋白達到3.941g/L;基礎日糧中添加此抗菌肽可顯著改善斷奶仔豬生產性能,提高養(yǎng)分消化率,增強免疫力,維護腸道組織形態(tài)結構,增強仔豬腸道屏障功能,維持腸道微生物區(qū)系,從而改善腸道健康。該研究結果表明,本實驗室研發(fā)的重組菌絲霉素抗菌肽具有替代抗生素在飼料工業(yè)中應用的潛力。
【關鍵詞】：菌絲霉素 抑菌效果 斷奶仔豬 生產性能 腸道健康
【學位授予單位】：四川農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S828.5
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 本文單詞縮寫10-14
• 前言14-15
• 第一章 文獻綜述15-23
• 1 飼用抗生素的危害及其替代品15-16
• 1.1 抗生素的危害15
• 1.2 飼用抗生素的主要替代品15-16
• 2 抗菌肽的研究進展16-20
• 2.1 抗菌肽的來源與分類16
• 2.2 抗菌肽生物學結構和功能16-17
• 2.3 抗菌肽免疫調節(jié)與屏障作用機制17-18
• 2.4 抗菌肽穩(wěn)定性及其分子改良方法18-19
• 2.5 抗菌肽在動物生產上的應用19-20
• 3 菌絲霉素研究進展20-23
• 3.1 菌絲霉素結構與功能20-21
• 3.2 菌絲霉素的分子改良21
• 3.3 菌絲霉素的應用及其存在的問題21-23
• 第二章 本試驗的目的意義,研究內容和技術路線23-25
• 1 本試驗的目的和意義23
• 2 研究內容23
• 3 技術路線23-25
• 第三章 試驗研究25-55
• 試驗一 重組菌絲霉素抗菌肽發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化及其體外抑菌效果的研究25-34
• 1 材料和方法25-30
• 1.1 材料25-28
• 1.2 方法28-29
• 1.3 考察指標與測定方法29-30
• 2 結果與分析30-32
• 2.1 不同培養(yǎng)基對重組畢赤酵母生長和細胞光密度的影響30-31
• 2.2 重組菌絲霉素抗菌肽SDS-PAGE檢測及體外抑菌效果31-32
• 3 討論32-34
• 4 小結34
• 試驗二 重組菌絲霉素抗菌肽在斷奶仔豬上的應用效果研究34-55
• 1 材料與方法35-42
• 1.1 試驗材料35
• 1.2 試驗動物與試驗設計35
• 1.3 試驗飼糧35-36
• 1.4 飼養(yǎng)管理36-37
• 1.5 樣品收集與處理37
• 1.6 試驗所需儀器和試劑37-38
• 1.6.1 試驗所需儀器37
• 1.6.2 所需試劑37-38
• 1.7 考察指標與方法38-41
• 1.7.1 生產性能38
• 1.7.2 腹瀉評分38
• 1.7.3 養(yǎng)分表觀消化率38-39
• 1.7.4 腸道黏膜中消化酶活性及木糖吸收試驗39
• 1.7.5 食糜中微生物菌群的數量39-40
• 1.7.6 腸道黏膜、血清免疫指標的測定40
• 1.7.7 腸道食糜pH值40
• 1.7.8 腸道切片40-41
• 1.7.9 消化和免疫器官指數41
• 1.7.10 緊密連接蛋白基因表達的影響41
• 1.8 數據統(tǒng)計分析41-42
• 2 試驗結果與分析42-49
• 2.1 重組菌絲霉素對斷奶仔豬生產性能和腹瀉的影響42
• 2.2 重組菌絲霉素對斷奶仔豬養(yǎng)分消化率的影響42-43
• 2.3 重組菌絲霉素對斷奶仔豬消化和免疫器官指數的影響43-44
• 2.4 重組菌絲霉素對斷奶仔豬血清和腸道免疫指標的影響44
• 2.5 重組菌絲霉素對斷奶仔豬木糖吸收試驗的影響44-45
• 2.6 重組菌絲霉素對斷奶仔豬小腸形態(tài)結構的影響45
• 2.7 重組菌絲霉素對斷奶仔豬腸道黏膜中消化酶活的影響45-46
• 2.8 重組菌絲霉素對斷奶仔豬腸道食糜PH值的影響46
• 2.9 重組菌絲霉素對斷奶仔豬緊密連接蛋白表達的影響46-48
• 2.10 重組菌絲霉素對斷奶仔豬腸道菌群結構的影響48-49
• 3 討論49-54
• 3.1 重組菌絲霉素對斷奶仔豬生產性能和養(yǎng)分消化代謝的影響49-50
• 3.2 重組菌絲霉素對斷奶仔豬免疫指標的影響50-51
• 3.2.1 重組菌絲霉素對斷奶仔豬血清免疫球蛋白的影響50-51
• 3.2.2 重組菌絲霉素對斷奶仔豬免疫器官指數的影響51
• 3.3 重組菌絲霉素對斷奶仔豬腸道健康的影響51-54
• 3.3.1 重組菌絲霉素對斷奶仔豬腹瀉指數、腸道形態(tài)和食糜pH的影響51-53
• 3.3.2 重組菌絲霉素對斷奶仔豬腸道微生物和腸道屏障功能的影響53-54
• 4 小結54-55
• 第四章 全文結論及有待進一步研究的問題55-56
• 1 全文結論55
• 2 有待進一步研究的問題55-56
• 參考文獻56-64
• 致謝64-65
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章65

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