流感病毒感染可誘發(fā)急性肺損傷(ALI)與其介導(dǎo)的大量I型干擾素(IFN-I)產(chǎn)生關(guān)系密切。干擾素調(diào)節(jié)因子(IRF)是負(fù)責(zé)IFN-I產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄因子家族,包括IRF1-9。盡管IRF3和IRF7被普遍認(rèn)為是調(diào)控IFN-I產(chǎn)生的主要轉(zhuǎn)錄因子,IRF家族所有成員都能識別/結(jié)合其靶基因啟動子上富含GAAA序列元件的特征提示可能都對流感病毒感染應(yīng)答。本文以流感病人鼻咽上皮細(xì)胞和流感模型小鼠肺組織作為局部應(yīng)答組織、流感模型小鼠外周血白細(xì)胞及其他組織如心、腸、肝、腎、脾、胃作為全身應(yīng)答組織,觀察了IRF家族成員對流感病毒應(yīng)答的表達(dá)譜變化,并用專職產(chǎn)生IFN-I的人p DC樣CAL-1細(xì)胞研究了流感病毒誘導(dǎo)IRF家族表達(dá)譜的變化規(guī)律及可能調(diào)控機(jī)制。本研究為流感病毒誘發(fā)急性免疫損傷如ALI的診斷和防治提供了分子靶標(biāo)。

【文章頁數(shù)】：158 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
提要
中文摘要
abstract
英文縮略詞表
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    (一)流感病毒感染與其相關(guān)免疫應(yīng)答
        1.1 流感病毒簡介
        1.2 流感病毒與固有免疫
        1.3 干擾素及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
        1.4 Ⅰ型干擾素與炎癥反應(yīng)
    (二)干擾素調(diào)節(jié)因子家族成員及其免疫調(diào)節(jié)作用
        2.1 IRF家族成員的結(jié)構(gòu)特征
        2.2 IRF家族成員的生物學(xué)功能
        2.3 IRF3、IRF5和IRF7是TLR及 RLR信號傳導(dǎo)中Ⅰ型 IFN表達(dá)的主要調(diào)控因子
    (三)寡脫氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)的研究進(jìn)展
        3.1 免疫刺激性寡脫氧核苷酸的結(jié)構(gòu)特征與功能
        3.2 免疫抑制性寡脫氧核苷酸的結(jié)構(gòu)特征與功能
    課題設(shè)計思路
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 流感病毒感染后對局部和全身IRF家族成員表達(dá)水平的影響
        前言
        第一節(jié) 流感病毒感染人局部組織中IRFs的表達(dá)水平變化
            1 材料與方法
                1.1 研究對象
                    1.1.1 患者鼻咽拭子標(biāo)本采集
                    1.1.2 鼻咽拭子標(biāo)本的病毒檢測和分類
                    1.1.3 IAV、IBV和非呼吸道感染者臨床指標(biāo)采集
                1.2 實驗試劑與器材
                1.3 實驗方法
                    1.3.1 IAV、IBV和非呼吸道感染患者鼻咽拭子標(biāo)本的收集及研究流程圖
                    1.3.2 鼻咽拭子標(biāo)本的處理和病毒檢測
                    1.3.3 Trizol法提取IAV、IBV和非呼吸道感染者鼻咽上皮細(xì)胞內(nèi)總RNA并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA
                    1.3.4 RT-qPCR法檢測流感病毒感染患者鼻咽拭子標(biāo)本中IRF家族成員的m RNA表達(dá)水平
                1.4 統(tǒng)計分析
            2 實驗結(jié)果
                2.1 不同流感病毒感染的鼻咽上皮細(xì)胞分類
                2.2 IAV、IBV和非呼吸道感染患者臨床資料分析
                2.3 流感病毒感染患者鼻咽上皮細(xì)胞中IRF家族成員的m RNA水平檢測
            3 討論
            4 小結(jié)
        第二節(jié) 流感病毒感染小鼠局部和全身組織中IRFs的表達(dá)水平變化及GAAA ODN對其的調(diào)節(jié)作用
            1 材料與方法
                1.1 實驗動物和細(xì)胞
                1.2 流感病毒
                1.3 寡脫氧核苷酸
                1.4 實驗試劑與器材
                1.5 實驗方法
                    1.5.1 流感病毒的擴(kuò)增和血凝效價的測定
                    1.5.2 流感病毒在MDCK細(xì)胞上半數(shù)組織細(xì)胞感染劑量(TCID50)的檢測
                    1.5.3 流感病毒感染小鼠LD50的檢測
                    1.5.4 流感病毒感染小鼠模型的建立
                    1.5.5 流感病毒感染小鼠肺及其他重要臟器組織中IRF家族m RNA水平的檢測
                    1.5.6 流感病毒感染小鼠經(jīng)GAAA ODN M1 干預(yù)處理后,小鼠肺及其他重要臟器組織中IRF家族m RNA水平的檢測
                1.6 統(tǒng)計分析
            2 實驗結(jié)果
                2.1 H1N1流感病毒的擴(kuò)增和血凝效價的測定
                2.2 H1N1流感病毒在MDCK細(xì)胞上半數(shù)組織細(xì)胞感染劑量的測定
                2.3 流感病毒感染BALB/c小鼠的LD50測定
                2.4 H1N1感染小鼠肺等臟器中IRF家族的m RNA表達(dá)譜及GAAA ODN M1對IRFs表達(dá)的調(diào)控作用
            3 討論
            4 小結(jié)
    第二章 流感病毒感染人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞后對IRFs,TLR3/7,RIG-Ⅰ及其下游信號分子表達(dá)的影響
        前言
        第一節(jié) 流感病毒感染人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞IRF-IFN-Ⅰ信號通路相關(guān)因子的表達(dá)
            1 材料與方法
                1.1 細(xì)胞
                1.2 流感病毒
                1.3 實驗試劑與器材
                1.4 實驗方法
                    1.4.1 流感病毒H1N1 感染不同時間對人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞IRF家族表達(dá)譜的影響
                    1.4.2 流感病毒H9N2 感染不同時間對人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞IRF家族表達(dá)譜的影響
                    1.4.3 流感病毒H1N1 感染不同時間對IRFs上游PRR受體信號通路(TLR3、TLR7、RIG-Ⅰ)和下游IFN-Ⅰ及炎癥因子表達(dá)影響
                    1.4.4 分別用人重組干擾素(rIFN-α2b)和重組rIFN-γ處理CAL-1 細(xì)胞對IRFs及ISGs表達(dá)的影響
                    1.4.5 統(tǒng)計分析
            2 實驗結(jié)果
                2.1 流感病毒H1N1 感染對人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞IRF家族表達(dá)譜的影響
                2.2 流感病毒H9N2 感染不同時間對人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞IRF家族表達(dá)譜的影響
                2.3 流感病毒H1N1 感染不同時間對IRFs上游PRR受體信號通路(TLR3、TLR7、RIG-Ⅰ)和下游IFN-Ⅰ及炎癥因子表達(dá)影響
                2.4 分別用人重組干擾素(rIFN-α2b)和重組rIFN-γ處理CAL-1 細(xì)胞對IRFs及 ISGs表達(dá)的影響
            3 討論
            4 小結(jié)
        第二節(jié) 流感病毒對CAL-1 細(xì)胞IRF家族及其上下游信號分子表達(dá)調(diào)控的可能機(jī)制探討
            1 材料與方法
                1.1 細(xì)胞
                1.2 流感病毒
                1.3 寡脫氧核苷酸
                1.4 實驗試劑與器材
                1.5 實驗方法
                    1.5.1 流感病毒感染人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞用人重組干擾素(rIFN-α2b)處理對IRF家族表達(dá)水平的影響
                    1.5.2 流感病毒感染人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞用人重組干擾素(rIFN-α2b)處理對TLR3/7及其下游信號分子表達(dá)水平的影響
                    1.5.3 流感病毒感染人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞同時用不同濃度的氯喹處理對IRF家族表達(dá)水平的影響
                    1.5.4 流感病毒感染人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞同時用不同濃度的氯喹處理對TLR3/7 及其下游信號分子表達(dá)水平的影響
                    1.5.5 流感病毒感染人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞同時用不同濃度的GAAA ODN A1 處理對IRF家族表達(dá)水平的影響
                    1.5.6 流感病毒感染人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞同時用不同濃度的GAAA ODN A1 處理對TLR3/7及其下游信號分子表達(dá)水平的影響
                    1.5.7 統(tǒng)計分析
            2 實驗結(jié)果
                2.1 重組rIFN-α2b,氯喹和GAAA ODN A1對H1N1感染的CAL-1 細(xì)胞中IRF家族表達(dá)譜的影響
                2.2 重組IFN-α2b,氯喹和GAAA ODN A1對H1N1感染的CAL-1 細(xì)胞中TLR3/7 及其下游信號分子表達(dá)的影響
            3 討論
            4 小結(jié)
        第三節(jié) 流感病毒感染CAL-1 細(xì)胞后對IRF3、IRF5和IRF7 磷酸化水平的影響
            1 材料與方法
                1.1 細(xì)胞
                1.2 流感病毒
                1.3 寡脫氧核苷酸
                1.4 實驗試劑與器材
                1.5 實驗方法
                    1.5.1 流感病毒感染人pDC樣 CAL-1 及用GAAA ODN A1 處理對IRF3,IRF5,IRF7 的表達(dá)和磷酸化水平的影響
                    1.5.2 GAAA ODN A1對H1N1感染CAL-1細(xì)胞中IRF5核轉(zhuǎn)位的影響
                    1.5.3 統(tǒng)計分析
            2 實驗結(jié)果
                2.1 流感病毒感染人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞及用GAAA ODN A1 處理對IRF3,IRF5,IRF7 的表達(dá)和磷酸化水平的影響
                2.2 GAAA ODN A1對H1N1感染CAL-1細(xì)胞中IRF5核轉(zhuǎn)位的影響
            3 討論
            4 小結(jié)
    第三章 不同單鏈RNA病毒對人pDC樣 CAL-1 細(xì)胞中IRFs、TLR3/7和RIG-Ⅰ及其下游信號分子表達(dá)的影響
        前言
        1 材料與方法
            1.1 細(xì)胞
            1.2 不同ssRNA病毒
            1.3 實驗試劑與器材
            1.4 實驗方法
                1.4.1 不同流感病毒感染CAL-1 細(xì)胞中TLR3、7和RIG-Ⅰ及其下游信號分子m RNA水平動態(tài)變化
                1.4.2 不同ssRNA病毒對IRF家族表達(dá)譜的影響
                1.4.3 統(tǒng)計分析
        2 實驗結(jié)果
            2.1 不同流感病毒感染CAL-1 細(xì)胞中TLR3、7和RIG-Ⅰ及其下游信號分子mRNA水平動態(tài)變化
            2.2 TNF-和 IFN-m RNA表達(dá)水平有可能是決定流感病毒致病性強(qiáng)弱和炎癥強(qiáng)弱的重要指標(biāo)
            2.3 不同ssRNA病毒對IRF家族表達(dá)譜的影響
        3 討論
        4 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝
附錄



本文編號：3919153