發(fā)布時(shí)間：2023-04-05 15:39

　　目的:前列腺組織主要由兩種類型上皮細(xì)胞組成,基底和管腔上皮細(xì)胞,兩者存在一定的相似性,同時(shí)又存在多種因素在兩者特異的表型方面參與調(diào)控及維持。本論文旨在:(1)研究前列腺基底上皮細(xì)胞特征是如何維持的?該過(guò)程需要哪些調(diào)控因子參與?(2)研究管腔上皮細(xì)胞特征是如何維持的?前列腺管腔上皮組織的三大屬性,細(xì)胞間連接、細(xì)胞極性和細(xì)胞分裂軸定位三者之間存在怎樣的相互作用?方法:通過(guò)開(kāi)展一系列體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)考察上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子在前列腺上皮組織中的表達(dá)模式及生物學(xué)功能,利用高通量單細(xì)胞RNA測(cè)序分析及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Zeb1表達(dá)上皮細(xì)胞中富集哪些相關(guān)信號(hào)通路調(diào)節(jié)因子來(lái)維持基底上皮干細(xì)胞亞群的干性、EMT特征和基底細(xì)胞的正常發(fā)育。通過(guò)開(kāi)展一系列體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)考察細(xì)胞間連接蛋白E-cadherin在前列腺上皮組織中的表達(dá)模式和黏附連接缺陷小鼠的表型。通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析和生化實(shí)驗(yàn)研究管腔上皮細(xì)胞特征維持的主要因素細(xì)胞間黏附連接蛋白E-cadherin,Scribble細(xì)胞極性蛋白復(fù)合物及LGN分裂紡錘體定位復(fù)合物三者之間的相互關(guān)系。所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)。結(jié)果:(1)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化核心轉(zhuǎn)錄因子Z...

【文章頁(yè)數(shù)】：218 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
緒論
    1.1 研究背景
    1.2 存在的科學(xué)問(wèn)題
    1.3 研究技術(shù)路線
    1.4 科學(xué)意義
第一部分 前列腺基底干細(xì)胞維持基底上皮細(xì)胞特征和正常發(fā)育
    第一章 引言
        1.1 上皮組織概述
        1.2 基底上皮細(xì)胞特征維持中的EMT機(jī)制及分裂模式
        1.3 EMT特征維持的信號(hào)通路
    第二章 實(shí)驗(yàn)材料與操作方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及人組織樣本
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器耗材
        2.2 實(shí)驗(yàn)操作方法
            2.2.1 小鼠基因型鑒定
            2.2.2 原代細(xì)胞獲得及細(xì)胞流式分選
            2.2.3 細(xì)胞甩片及免疫熒光染色
            2.2.4 冰凍切片及免疫熒光染色
            2.2.5 石蠟切片及其H&E染色
            2.2.6 質(zhì)粒抽提實(shí)驗(yàn)
            2.2.7 病毒制備及目的細(xì)胞感染
            2.2.8 類器官培養(yǎng)及功能檢測(cè)
            2.2.9 泌尿生殖竇間質(zhì)細(xì)胞分離及培養(yǎng)
            2.2.10 原代前列腺上皮細(xì)胞分離及腎包膜移植實(shí)驗(yàn)
            2.2.11 譜系示蹤實(shí)驗(yàn)
            2.2.12 單細(xì)胞RNA測(cè)序和數(shù)據(jù)分析
            2.2.13 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
            2.2.14 蛋白免疫印跡
            2.2.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 發(fā)現(xiàn)EMT轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的前列腺上皮細(xì)胞
        3.2 高通量單細(xì)胞RNA-seq發(fā)現(xiàn)Zeb1⁺前列腺上皮細(xì)胞群
            3.2.1 獲得前列腺基底上皮單細(xì)胞
            3.2.2 獲得高質(zhì)量單細(xì)胞RNA測(cè)序數(shù)據(jù)
            3.2.3 單細(xì)胞RNA-seq數(shù)據(jù)分析得到Zeb1⁺基底上皮細(xì)胞亞群
        3.3 Zeb1⁺上皮細(xì)胞與前列腺上皮組織之間的相關(guān)性研究
            3.3.1 成功構(gòu)建Zeb1 熒光報(bào)告小鼠
            3.3.2 Zeb1 在前列腺上皮細(xì)胞中的分布及表達(dá)模式
        3.4 Zeb1⁺前列腺基底上皮細(xì)胞的生物學(xué)功能研究
            3.4.1 體外Zeb1⁺基底上皮細(xì)胞類器官形成實(shí)驗(yàn)
            3.4.2 體內(nèi)Zeb1⁺基底上皮細(xì)胞腎包膜移植實(shí)驗(yàn)
            3.4.3 體內(nèi)譜系示蹤Zeb1⁺基底上皮細(xì)胞多向分化的命運(yùn)
            3.4.4 Zeb1 保證基底上皮細(xì)胞正常發(fā)育
        3.5 Wnt信號(hào)通路正向調(diào)控Zeb1⁺基底上皮細(xì)胞
            3.5.1 單細(xì)胞RNA-seq數(shù)據(jù)顯示Zeb1⁺基底上皮細(xì)胞富集Wnt信號(hào)通路
            3.5.2 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果支持單細(xì)胞RNA-seq數(shù)據(jù)分析結(jié)果
            3.5.3 APCmin模型小鼠中Zeb1⁺基底上皮細(xì)胞比例顯著增多
        3.6 研究模型圖及小結(jié)
    第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)論、討論及展望
        4.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
        4.2 討論和展望
        4.3 科學(xué)意義
第二部分 細(xì)胞連接、細(xì)胞極性和細(xì)胞分裂軸定位共同維持前列腺管腔上皮細(xì)胞的組織特征
    第一章 引言
        1.1 上皮細(xì)胞極性的建立及維持
            1.1.1 上皮細(xì)胞極性組成-PAR complex
            1.1.2 上皮細(xì)胞極性組成-Scribble complex
            1.1.3 上皮細(xì)胞三種極性蛋白復(fù)合物之間的互作及應(yīng)用
        1.2 上皮細(xì)胞間連接的建立及功能
        1.3 細(xì)胞分裂模式基礎(chǔ)知識(shí)
            1.3.1 細(xì)胞分裂模式相關(guān)分子調(diào)控機(jī)制
            1.3.2 細(xì)胞分裂模式研究的應(yīng)用
    第二章 實(shí)驗(yàn)材料與操作方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞系、質(zhì)粒
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器耗材
        2.2 實(shí)驗(yàn)操作方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 石蠟切片及其免疫組織化學(xué)染色
            2.2.3 細(xì)胞增殖
            2.2.4 細(xì)胞實(shí)時(shí)示蹤實(shí)驗(yàn)
            2.2.5 內(nèi)源性免疫共沉淀
            2.2.6 GST-pull down實(shí)驗(yàn)
    第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 黏附連接蛋白集中表達(dá)及分布在成年小鼠前列腺管腔上皮細(xì)胞間
            3.1.1 qRT-PCR結(jié)果顯示黏附連接蛋白集中分布在前列腺管腔上皮細(xì)胞間
            3.1.2 免疫熒光染色結(jié)果表明黏附連接蛋白集中分布在前列腺管腔上皮細(xì)胞間
        3.2 黏附連接E-cadherin缺失促進(jìn)前列腺管腔上皮細(xì)胞增殖能力及腫瘤發(fā)生發(fā)展
            3.2.1 體外E-cadherin表達(dá)下調(diào)促進(jìn)前列腺上皮細(xì)胞增殖能力
            3.2.2 E-cadherin前列腺特異性敲除小鼠模型構(gòu)建及表型探究
        3.3 黏附連接蛋白E-cadherin表達(dá)缺失導(dǎo)致細(xì)胞分裂軸定位異常
            3.3.1 體外黏附連接蛋白表達(dá)下調(diào)嚴(yán)重影響細(xì)胞分裂軸正確定位
            3.3.2 體內(nèi)黏附連接缺陷造成管腔上皮細(xì)胞分裂軸偏轉(zhuǎn)隨機(jī)化
            3.3.3 體外黏附連接蛋白表達(dá)下調(diào)顯著減弱蛋白LGN-NUMA的結(jié)合能力
            3.3.4 體內(nèi)黏附連接缺失導(dǎo)致LGN蛋白復(fù)合物細(xì)胞膜分布異常
        3.4 黏附連接蛋白E-cadherin丟失導(dǎo)致細(xì)胞極性蛋白復(fù)合物彌散分布
            3.4.1 體外敲低黏附連接蛋白表達(dá)水平顯著削弱蛋白DLG-SCRIB的結(jié)合能力
            3.4.2 體內(nèi)黏附連接缺失造成細(xì)胞極性蛋白復(fù)合物分布異常
        3.5 考察細(xì)胞連接、細(xì)胞極性和分裂軸定位三者間的互作及分子機(jī)制
            3.5.1 RNA-seq分析結(jié)果支持細(xì)胞連接、極性和分裂軸定位之間存在緊密互作
            3.5.2 增殖活躍的E-cadherin蛋白表達(dá)缺失的管腔上皮細(xì)胞更易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)化
            3.5.3 E-cadherin/SCRIB/LGN三元復(fù)合物的形成維持前列腺管腔上皮組織結(jié)構(gòu)
        3.6 研究模型圖及小結(jié)
    第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)論、討論及展望
        4.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
        4.2 討論和展望
        4.3 科學(xué)意義
全文總結(jié)
    1.1 研究總結(jié)
    1.2 研究創(chuàng)新性
    1.3 科學(xué)意義
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間已發(fā)表或錄用的論文



本文編號(hào)：3783674