【摘要】：藤梨根為獼猴桃屬植物中華獼猴桃(Actindia chinensis Planch)的干燥根,其味苦,性寒,具有清熱利濕、解毒消腫、散瘀通絡(luò)等作用。臨床上主要用于肝炎、濕熱黃疸、痢疾、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、消化道腫瘤等。本課題對(duì)藤梨根進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究,并對(duì)所獲得的三萜類(lèi)成分進(jìn)行了抗腫瘤活性研究。采用硅膠柱色譜、C18反相柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜以及HPLC等方法,從藤梨根乙醇浸提物的乙酸乙酯部位共分離并鑒定了 18個(gè)化合物,其結(jié)構(gòu)分別為:ursolic acid(1);2α,3α,24-trihydroxyolean-12-en-28-oic acid(2);corosolic acid(3);cleomiscosin A(4);isolariciresinal(5);7,8-trans-3,5'-dimethoxy-4',7-epoxy-8,3'-neolignane-5,9,9'-triol(6);7R,8R-threo-4,7,9,9'-tetrahydroxy-3,3'-dimethoxy-8-O-4'-neolignan(7);7S,,8S,-threo-4,7,9,9'-tetrahydroxy-3,3'-dimethoxy-8-0-4'-neolignan(8);quercetin(9);3,5,7,3',5'-pentahydroxyflavan(10);fraxetin(11);scopoletin(12);β-sitosterol(13);daucosterol(14);vanillic acid(15);methyl caffeate(16);2,6-dihydroxy-1,4-benzenedicarboxy lic acid dimethyl ester(17);2,3-dihydroxypropyl stearate(18)。其中,化合物 4,5,6,7,8,10,11,12,16,17,18為首次從該植物中分離得到。三萜類(lèi)為藤梨根中主要的抗癌活性成分。采用MTT法對(duì)所獲得三萜類(lèi)成分1,2和3進(jìn)行抗肺癌細(xì)胞增殖活性篩選。結(jié)果表明,化合物2和3對(duì)肺癌NCI-H292細(xì)胞有增殖抑制作用,其IC50值分別為29.28 μ和12.20 μM;同時(shí),化合物3對(duì)肺癌A549細(xì)胞也有一定的增殖抑制作用,其IC50值為33.83 μM。我們選取藤梨根中含量較大,對(duì)肺癌NCI-H292細(xì)胞有一定增殖抑制作用,對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮EA.hy926細(xì)胞無(wú)毒性作用的化合物2(TLG-2)做進(jìn)一步研究。MTT實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)時(shí)生長(zhǎng)檢測(cè)(RTCA)實(shí)驗(yàn)表明TLG-2能夠劑量依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性的抑制肺癌NCI-H292細(xì)胞增殖;PI單染實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TLG-2并不能引起肺癌細(xì)胞周期的改變;DAPI染色實(shí)驗(yàn)和Annexin V/PI雙染實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TLG-2能夠誘導(dǎo)肺癌NCI-H292細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),TLG-2能夠誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS累積、線粒體膜電勢(shì)(MMP)降低。Western blot結(jié)果表明TLG-2能誘導(dǎo)促凋亡蛋白Bax表達(dá)增加,抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL表達(dá)減少,細(xì)胞色素c(Cytochromec)釋放,進(jìn)一步激活caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng),導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Western blot結(jié)果和免疫熒光結(jié)果顯示,TLG-2能促使凋亡誘導(dǎo)因子AIF入核,使核內(nèi)的DNA斷裂,引發(fā)凋亡。綜上所述,TLG-2能夠通過(guò)線粒體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。去氫鴉膽苦醇B(DHB)是從鴉膽子中分離得到的苦木素類(lèi)化合物,前期的研究表明DHB能夠誘導(dǎo)肺癌A549和NCI-H292細(xì)胞凋亡。本課題主要研究DHB在低濃度下能夠促進(jìn)順鉑(CDDP)誘導(dǎo)的肺癌A549細(xì)胞凋亡。RTCA結(jié)果表明,DHB能夠增強(qiáng)CDDP誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖抑制作用;DAPI染色及Annexin V/PI雙染的結(jié)果表明DHB能夠促進(jìn)CDDP誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡;DHB與CDDP聯(lián)用,能夠?qū)е录?xì)胞MMP降低,細(xì)胞色素c釋放以及AIF入核;進(jìn)一步研究表明,DHB與CDDP聯(lián)用能使凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)發(fā)生改變,如:促凋亡蛋白Bax表達(dá)增加,抑凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL表達(dá)減少;同時(shí)還能使活化的caspase-9、caspase-3以及PARP蛋白表達(dá)增加。這說(shuō)明DHB能夠通過(guò)線粒體介導(dǎo)的凋亡途徑增強(qiáng)CDDP誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。腫瘤細(xì)胞中的Nrf2高表達(dá)能夠?qū)е履[瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性。我們檢測(cè)到DHB能夠時(shí)間依賴(lài)性和劑量依賴(lài)性的降低A549細(xì)胞內(nèi)Nrf2的表達(dá),同時(shí)也能劑量依賴(lài)性的降低Nrf2下游蛋白的表達(dá)。RT-PCR結(jié)果顯示,DHB能劑量依賴(lài)性的抑制Nrf2及其下游基因的表達(dá),這可能使得細(xì)胞內(nèi)的ROS累積,最終導(dǎo)致ROS誘導(dǎo)的線粒體凋亡。這些結(jié)果表明,DHB與CDDP聯(lián)合使用具有協(xié)同抗肺癌的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R284;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2448026