目的 構(gòu)建腫瘤相關(guān)抗原表皮生長(zhǎng)因子受體特異性嵌合抗原受體（EGFR-CAR）和程序性死亡受體-配體1（PD-L1）抗體雙修飾慢病毒載體表達(dá)系統(tǒng)。方法 人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,經(jīng)細(xì)胞融合、亞克隆篩選高分泌PD-L1特異性抗體的穩(wěn)定雜交瘤,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和Western blot檢測(cè)抗體特異性,流式細(xì)胞術(shù)（FACS）鑒定對(duì)PD-1配受體封阻性能,Fortebio測(cè)定抗體親和力,抗體全長(zhǎng)測(cè)序,經(jīng)保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后構(gòu)建單鏈抗體（single-chain variable fragment,scFv）；人EGFR單克隆抗體雜交瘤系,經(jīng)5′RACE技術(shù)擴(kuò)增其輕鏈和重鏈可變區(qū)（VL和VH）基因,構(gòu)建scFv,克隆至真核載體pcDNA3.1表達(dá)鑒定�；蚝铣蒃GFR-CAR（引入CD137協(xié)同信號(hào)胞內(nèi)功能域）與PD-L1-scFv借助2A序列連接,克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表達(dá)載體,使用Lenti-X Packaging Single Shots （VSV-G）共同轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,獲得包裝病毒,感染29... 

【文章來(lái)源】：中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2020,(03)

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