[目的]構(gòu)建點(diǎn)突變的GLP-1Gly8,并與人血清白蛋白(HSA)結(jié)構(gòu)域Ⅰ融合,延長GLP-1的半衰期。[方法]采用常規(guī)PCR擴(kuò)增白蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅰ片段,利用SOE-PCR擴(kuò)GLP-1Gly8基因并將兩個基因拼接,得到的HSA-GLP-1Gly8融合基因經(jīng)Bam HⅠ和XhoⅠ雙酶切后連接到p ET30a表達(dá)載體,重組質(zhì)粒p ET30a-HSA-GLP-1Gly8轉(zhuǎn)入E.coli BL21(DE3)宿主菌中進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。[結(jié)果]PCR擴(kuò)增分別獲得140 bp的GLP-1Gly8基因499 bp的HSA的片段及經(jīng)融合后的HSA-GLP-1Gly8基因。表達(dá)載體p ET30a-HSA-GLP-1Gly8在E.coli BL21(DE3)宿主菌中經(jīng)IPTG誘導(dǎo),過表達(dá)了分子量約為22 k Da的融合蛋白。[結(jié)論]成功構(gòu)建了p ET30a-HSA-GLP-1Gly8原核表達(dá)載體,融合蛋白在BL21(DE3)菌中以包涵體的形式過表達(dá)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.2 試劑
        1.1.3 儀器
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計
        1.2.2 PCR擴(kuò)增GLP-1Gly8和HSA
        1.2.3 p ET30a-HSA-GLP-1Gly8表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.4 重組菌生長曲線測定
        1.2.5 HSA-GLP-1Gly8融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
2 結(jié)果與分析
    2.1 HSA和GLP-1Gly8基因的PCR擴(kuò)增
    2.2 HSA-GLP-1Gly8融合基因的PCR擴(kuò)增
    2.3 p ET30a-HSA-GLP-1Gly8表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.4 重組菌的生長曲線
    2.5 HSA-GLP-1Gly8融合蛋白的表達(dá)
3 討論
4 結(jié)論



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