發(fā)布時間：2024-07-11 04:11

　　目的利用Cre-loxP重組酶系統(tǒng)研究mRNA在細胞間傳遞過程及意義。方法構建和篩選穩(wěn)定表達Cre重組酶的供體細胞及穩(wěn)定表達loxP-DsRed-loxP-eGFP的受體細胞。將供、受體細胞共培養(yǎng)或在Transwell^TM中共培養(yǎng),設置單獨受體細胞組為對照,72 h后觀察統(tǒng)計各組受體細胞eGFP陽性率,利用細胞免疫熒光細胞染色檢測eGFP陽性細胞中Cre表達情況,并探討供體細胞死亡、細胞膜納米管、 Rho相關激酶(ROCK)信號通路對Cre mRNA傳遞的影響。結果將供、受體細胞共培養(yǎng)72 h后發(fā)現(xiàn),共培養(yǎng)組eGFP為陽性,單獨受體細胞組、 Transwell^TM共培養(yǎng)組eGFP均為陰性,表明細胞接觸可以介導Cre mRNA傳遞,免疫熒光染色結果顯示Cre蛋白可在受體細胞中翻譯和入核。此外,Cre mRNA的傳遞主要通過活細胞,而膜納米管及ROCK信號通路抑制劑可部分阻滯該過程。結論 mRNA可以通過細胞間接觸在活細胞中傳遞,進入受體細胞后還可翻譯成蛋白質發(fā)揮生物學功能。

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 重組慢病毒質粒pLVX-IRES-Neo-Cre的構建
        1.2.2 慢病毒包裝和穩(wěn)定轉染細胞株構建
        1.2.3 單克隆細胞株的制備
        1.2.4 免疫熒光細胞化學染色檢測細胞中Cre蛋白的表達和分布
        1.2.5 供、 受體細胞共培養(yǎng)及受體細胞中eGFP表達統(tǒng)計
        1.2.6 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 單克隆細胞株的篩選和驗證
    2.2 受體細胞可以被Cre蛋白重組并表達eGFP
    2.3 細胞間直接接觸介導Cre傳遞
    2.4 Cre mRNA在受體細胞中的翻譯可介導受體細胞基因組重組
    2.5 Cre mRNA的傳遞不依賴mNT和死亡細胞
3 討論



本文編號：4005229