目的對CRISPR相關(guān)蛋白Cas3、Cas6及Cas9進行表達純化,并測定其活性。方法在體外構(gòu)建帶有目的基因的質(zhì)粒,導(dǎo)入大腸桿菌表達系統(tǒng),通過大腸桿菌的過表達,裂解并提取蛋白,利用His標簽,可將目的蛋白純化出來;通過3種Cas蛋白對不同核酸的切割,分別設(shè)計3種核酸底物,再通過聚丙烯酰胺凝膠電泳,最終確定Cas蛋白的活性。結(jié)果成功表達并純化得到Cas3、Cas6及Cas93種蛋白,并根據(jù)其蛋白特性,與相應(yīng)的核酸底物進行孵育,在電泳后通過凝膠成像,可觀察到3種蛋白均具有活性。結(jié)論表達純化的Cas3、Cas6及Cas9具有生物學(xué)功能,為其功能機制研究奠定了基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 蛋白表達
            1.2.1.1 Cas3
            1.2.1. 2 Cas6和Cas9
            1.2.1. 3 純化與透析
        1.2.2 酶活驗證
            1.2.2. 1 Cas3
            1.2.2.2 Cas6
            1.2.2. 3 Cas9
2 結(jié)果
    2.1 蛋白的表達與純化
    2.2 濃度測定
    2.3 Cas3酶活驗證
    2.4 Cas6酶活驗證
    2.5 Cas9酶活驗證
3 討論



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