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N-脫氧核糖轉(zhuǎn)移酶Ⅱ突變體高通量篩選方法及迭代飽和定點突變研究

發(fā)布時間:2023-01-08 15:37
  利用瑞士乳桿菌來源的N-脫氧核糖轉(zhuǎn)移酶Ⅱ(Lh. NDT)催化合成2’-脫氧胞苷的反應,建立高通量篩選突變體方法,利用微量滴定板分析快速便捷,顯色反應靈敏度高,可以準確區(qū)分失活,活性增強與活性減弱的突變體,為成功篩選出高轉(zhuǎn)化率突變體奠定的基礎,計劃通過迭代飽和定點突變構(gòu)建NDT的突變體庫,獲得合成2’-脫氧胞高轉(zhuǎn)化率的NDT突變體。 

【文章頁數(shù)】:5 頁

【文章目錄】:
1 利用NDT催化合成2'-脫氧胞苷
2 迭代飽和定點突變(Iterative saturation mutagenesis,ISM)
3 NDT活性檢測
4 同源建模與關(guān)鍵活性位點的確定
5 飽和定點突變突變體庫的構(gòu)建
6 胞苷脫氨酶聯(lián)合Berthelot顯色反應用于NDT活性檢測
    6.1 Berthelot顯色反應的線性范圍
    6.2 胞苷脫氨酶聯(lián)合Berthelot顯色反應用于NDT活性檢測
    6.3 大腸桿菌內(nèi)源胞苷脫氨酶活性檢驗
7 高通量全細胞篩選



本文編號:3728730

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