水葫蘆（Eichhornia crassipes）是一種外來入侵植物,它能夠高效吸收氮和磷,因此在富營養(yǎng)化水體中能夠快速生長。它的瘋長破壞了水體生態(tài)平衡,造成很大經(jīng)濟損失,但控制種養(yǎng)水葫蘆,又可以利用它來凈化水質(zhì),因此研究水葫蘆磷轉(zhuǎn)運蛋白基因（Eichhornia crassipes phosphate transporter,EcPHT）,有利于揭示水葫蘆對富營養(yǎng)化水體中磷吸收的分子機理,揭示水葫蘆快速入侵的分子機理,為水葫蘆合理開發(fā)和利用提供理論基礎(chǔ)。磷（Phosphorus,P）是植物生長發(fā)育過程中不可缺少的營養(yǎng)元素,是核酸、ATP、磷脂的重要組成之一。研究水葫蘆運蛋白基因能夠為高效吸收磷的經(jīng)濟作物高效磷吸收提供借鑒,能夠為優(yōu)良農(nóng)作物的遺傳育種提供新的基因資源。本文利用二十多種植物的高親和力磷轉(zhuǎn)運蛋白（Phosphate Transporter 1,PHT1）基因保守序列設(shè)計出簡并引物,克隆出水葫蘆EcPHT中間片段710 bp。利用RACE技術(shù),獲得EcPHT基因的5’端和3’端片段,EcPHT基因全長序列通過拼接獲得。EcPHT基因完整的開放閱讀框1572 bp,編碼523個... 

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 水葫蘆的概況
        1.1.1 水葫蘆的簡介
        1.1.2 水葫蘆研究狀況
    1.2 植物體內(nèi)的磷元素
        1.2.1 磷元素在植物體內(nèi)的生理作用
        1.2.2 植物對磷的吸收和轉(zhuǎn)運機制
    1.3 植物磷轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白基因的研究進展
        1.3.1 植物磷轉(zhuǎn)運蛋白基因的類型
        1.3.2 植物磷轉(zhuǎn)運蛋白的功能鑒定
        1.3.3 植物PHT1 家族的研究進展
        1.3.4 植物PHR1 家族的研究進展
    1.4 研究目的、意義及內(nèi)容
        1.4.1 研究目的和意義
        1.4.2 研究的內(nèi)容
第二章 水葫蘆磷轉(zhuǎn)運蛋白基因EcPHT全長的克隆及序列分析
    2.1 引言
    2.2 實驗材料與試劑
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗試劑盒與酶
        2.2.3 化學(xué)試劑
        2.2.4 培養(yǎng)基配方與菌種
        2.2.5 主要實驗儀器
        2.2.6 引物
    2.3 主要實驗方法
        2.3.1 水葫蘆EcPHT中間片段的克隆
        2.3.2 EcPTT基因RACE克隆
        2.3.3 EcPTT基因的全長克隆
        2.3.4 基因序列分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 實驗結(jié)果電泳圖
        2.4.2 水葫蘆EcPHT基因序列的分析
    2.5 討論
第三章 水葫蘆EcPHT基因在酵母表達(dá)系統(tǒng)的功能鑒定
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗菌種與質(zhì)粒
        3.2.2 實驗試劑與試劑盒
        3.2.3 培養(yǎng)基配方
        3.2.4 引物
    3.3 實驗方法
        3.3.1 質(zhì)粒PYES2 的提取
        3.3.2 載體構(gòu)建
        3.3.3 酵母感受態(tài)制備、轉(zhuǎn)化
        3.3.4 酵母中的質(zhì)粒提取
    3.4 實驗結(jié)果與分析
        3.4.1 實驗結(jié)果電泳圖
        3.4.2 酵母功能互補實驗結(jié)果
        3.4.3 不同pH值和時間下酵母菌生長狀況
    3.5 討論
第四章 水葫蘆EcPHT的表達(dá)研究
    4.1 引言
    4.2 實驗材料與方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗方法
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 Real-time PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線
        4.3.2 EcPHT基因在水葫蘆體內(nèi)的表達(dá)情況
        4.3.3 水葫蘆濕重?zé)o機磷含量測量
    4.4 討論
第五章 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水葫蘆EcPHT基因轉(zhuǎn)化煙草
    5.1 引言
    5.2 實驗材料與方法
        5.2.1 實驗材料
        5.2.2 實驗方法
    5.3 實驗結(jié)果與分析
        5.3.1 實驗結(jié)果電泳圖
        5.3.2 煙草生長情況
    5.4 討論
第六章 EcPHT轉(zhuǎn)基因煙草中磷轉(zhuǎn)運蛋白基因及相關(guān)基因的表達(dá)研究
    6.1 引言
    6.2 實驗材料與方法
        6.2.1 實驗材料
        6.2.2 實驗方法
    6.3 實驗結(jié)果
        6.3.1 Real-time PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線
        6.3.2 NtPHT、NtPHR、EcPHT基因熒光定量PCR結(jié)果分析
        6.3.3 轉(zhuǎn)基因煙草磷含量的測量
    6.4 討論
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝
附錄1 EcPHT基因保守序列片段BLAST比對
附錄2 煙草actin序列片段
附錄3


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]植物磷轉(zhuǎn)運子PHT1家族研究進展[J]. 董旭,王雪,石磊,蔡紅梅,徐芳森,丁廣大.  植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報. 2017(03)
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[9]水葫蘆肌動蛋白基因片段的克隆及序列分析[J]. 蔣麗花,傅明輝,彭進平.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(09)
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博士論文
[1]菌根化馬尾松Pht1家族磷轉(zhuǎn)運蛋白基因的克隆及表達(dá)分析[D]. 張婷.貴州大學(xué) 2017
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[3]磷酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白OsPT5/OsPT7與質(zhì)子焦磷酸酶AVP1D影響植物磷素吸收轉(zhuǎn)運和生長發(fā)育的機制研究[D]. 張曉.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[4]小麥磷轉(zhuǎn)運蛋白基因TaPHT2;1和TaPT2介導(dǎo)植株吸收利用磷素的生物學(xué)功能研究[D]. 郭程瑾.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
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[6]三種茄科作物Pht1家族磷轉(zhuǎn)運蛋白基因的克隆及表達(dá)調(diào)控分析[D]. 陳愛群.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]大豆根部特異表達(dá)的磷轉(zhuǎn)運子基因GmPT4的功能分析[D]. 林志豪.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]水葫蘆氮代謝相關(guān)基因的克隆及表達(dá)研究[D]. 嚴(yán)國花.廣東工業(yè)大學(xué) 2015
[3]水葫蘆谷氨酰胺合成酶基因的克隆及表達(dá)[D]. 蔣麗花.廣東工業(yè)大學(xué) 2014
[4]水葫蘆銨轉(zhuǎn)運蛋白基因的克隆及表達(dá)分析[D]. 李園枚.廣東工業(yè)大學(xué) 2013
[5]水稻磷轉(zhuǎn)運蛋白OsPT4的生理功能鑒定[D]. 吳娜.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[6]番茄磷轉(zhuǎn)運蛋白基因LePT1和LePT2在水稻中的功能鑒定[D]. 洪帥.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[7]短柄草磷轉(zhuǎn)運蛋白基因的克隆與功能分析[D]. 馬彩艷.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[8]小麥磷轉(zhuǎn)運蛋白基因的分子特征和生物學(xué)功能研究[D]. 張立軍.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[9]水稻磷轉(zhuǎn)運蛋白基因OsPTl的功能研究[D]. 黃新朋.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[10]鹽芥鈉磷轉(zhuǎn)運體基因在轉(zhuǎn)基因煙草中的功能鑒定[D]. 王榮春.山東大學(xué) 2008



本文編號：3721682