內(nèi)消旋-丁二醇脫氫酶（Meso-butanediol dehydrogenase,MBD）是睪丸酮叢毛單胞菌（Comamonas testosteroni,C.T.）ATCC11996中的一種酶。因其能夠催化反應(yīng)產(chǎn)生大量的乙偶姻（Acetoin,AC）和內(nèi)消旋-2,3-丁二醇（Meso-2,3-butanediol,meso-2,3-BD）生物產(chǎn)物,成為專家學者關(guān)注的熱點。本文以MBD為研究對象,探索該酶在睪丸酮叢毛單胞菌中對甾體類激素代謝的影響及基因調(diào)控情況。通過激素誘導、總RNA提取、全轉(zhuǎn)錄組測序、測序信息比對、基因擴增、構(gòu)建基因表達載體、外源蛋白表達、蛋白質(zhì)親和層析純化、基因敲除、質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化、高效液相、ELISA等實驗方法,結(jié)果表明:經(jīng)睪丸酮誘導后的C.T.菌中共有4835個基因在轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生了差異,有110個顯著差異基因,其中MBD基因差異Log2值達到1.80,與未誘導前差異達3.48倍。通過構(gòu)建MBD敲除型C.T.株,并使用高效液相色譜法檢測其對于睪丸酮、甲睪酮、雌酮、雌二醇等甾體類激素的降解能力,研究表明將C.T.菌中的內(nèi)消旋-丁二醇脫氫酶基因敲除后對睪丸酮的降解率為27... 

【文章來源】：長春理工大學吉林省

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

MBD參與的主要反應(yīng)Fig1.1ThemainreactionofMBDparticipation

9圖 2.3 信息分析流程圖Figure 2.3 InformationAnalysis Flow Chart2.3 實驗結(jié)果2.3.1 C.T.菌生長曲線每 1 h 取 1 mL 菌液在 600 nm 波長下測定其吸光度結(jié)果如表 2-3 所示。表 2-3 菌液吸光度Table 2-3 Bacterial absorbance培養(yǎng)時間（h）CT1（OD） CT2（OD） CT （OD） T1（OD） T2（OD） T（OD）0 0.134 0.138 0.136 0.138 0.138 0.1381 0.124 0.122 0.123 0.130 0.132 0.1312 0.145 0.143 0.144 0.142 0.144 0.143

圖 2.4 clean reads 的堿基含量分布Figure 2.4 base content distribution of clean readsX 軸代表堿基在 read 中的位置，Y 軸為堿基的比例，不同顏色代表不同的堿基類型。圖中6bp 的波動為正常現(xiàn)象。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)在生物測序中的應(yīng)用研究進展[J]. 賈昌路,張瑤,朱玲,張銳.  分子植物育種. 2015(10)
[2]污水中類固醇雌激素污染及其生物降解研究進展[J]. 馮麗娟,朱亮,徐向陽.  安全與環(huán)境學報. 2011(05)
[3]睪丸酮叢毛單胞菌LysR基因的克隆及對3α-HSD/CR表達的調(diào)節(jié)[J]. 李明堂,王清爽,于源華.  吉林農(nóng)業(yè)大學學報. 2011(06)
[4]甾體雌激素的污染水平及轉(zhuǎn)化機制[J]. 吳明紅,任來堂,徐剛,郭瑞云.  自然雜志. 2010(02)
[5]環(huán)境激素可讓男性不育[J]. 陸基宗.  生活與健康. 2007(06)
[6]甾體雌激素的污染狀況與去除途徑[J]. 任海燕,紀樹蘭,崔成武,劉志鵬,王道,陳莎.  中國給水排水. 2004(12)
[7]環(huán)境農(nóng)藥激素污染與防治[J]. 匡少平,張書圣.  環(huán)境保護. 2002(07)



本文編號：3438306