研究背景膽堿酯酶是一類以同工酶的形式存在于生物體內(nèi)的糖蛋白。主要包括乙酰膽堿酯酶（Acetylcholinesterase,AChE）和丁酰膽堿酯酶（Butylcholinesterase,BChE）。AChE能夠水解神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿（Acetylcholine,ACh）,但是BChE的生物學功能尚未被完全闡明。斑馬魚是重要的脊椎動物模型。已有研究鑒定了斑馬魚的AChE基因,斑馬魚雖具有BChE活性,但其BChE同源基因至今未明。斑馬魚未命名基因si:dkey-30c15.17、si:ch73-89b15.3在數(shù)據(jù)庫中被預(yù)測具有膽堿酯酶結(jié)構(gòu)域,但尚未被鑒定。因此對這兩個基因膽堿酯酶活性的研究,對于鑒定出斑馬魚中編碼BChE活性蛋白的基因并對其功能進行的研究能提供重要的理論基礎(chǔ)與實驗依據(jù),對于完善整個膽堿酯酶基因家族的功能研究,也有重要意義。目的分析si:dkey-30c15.17、si:ch73-89b15.3這兩個基因在斑馬魚中的表達圖譜,探究其是否具有膽堿酯酶活性。內(nèi)容1.斑馬魚BChE活性驗證通過收集斑馬魚受精后早期發(fā)育不同時期（0、1、2、3、4、5、6 dpf）的胚胎以及斑馬... 

【文章來源】：廣東工業(yè)大學廣東省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１Ｃ、１－１Ｄ、??１－１Ｅ、１－１Ｆ所示，蛋白的三維結(jié)構(gòu)如圖１－１Ｇ、１－１Ｈ，這兩個基因均具有膽堿酯酶結(jié)構(gòu)??域?

?廣東工業(yè)大學碩士學位論文???Ａ?１００?１１０?１２０??ＣＴ?ＧＡＴ?Ｇ?ＧＴ?ＣＴ?Ｇ?ＧＴＧＣ＆ＧＡＴＣＣＡ?ＧＴＧ?Ｇ?Ｔ?Ｔ?Ｇ?Ｔ?Ｃ??［ｊ?［Ｉ??ｗｉｉｍｋｋｉｗｊｙｋ??Ｂ?ｉｏｏ?＿?ｎｏ?＿?ｉ２〇??Ｇ?ａＥｃ〒ｇ?ｔ?ｔａｃ?ｔｃ?ｃａｔｇ?ｇ?ｇ?ｇ?ｔａｔａｔ?ｇ?ａｔ?ｇ?ｃ?ｃ?ｔ?ｃ?ｃ??圖５－５基因ＳＩ？。備吁－刈ｃ７５．Ｊ７和Ｗ：ｃ／ｉ?７５－卵Ｗ５．３Ｆ２代純合子測序峰圖??Ｆｉｇ．５－５?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｓｉ：ｄｋｅｙ－３０ｃｌ５．１７?ａｎｄｓｉ：ｃｈ７３－８９ｂｌ５．３?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｐｅａｋ?ｍａｐ?ｉｎ?Ｆ２??ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ??圖５－５?Ａ為基因沿ｉ?７?Ｆ２代純合子測序峰圖，圖５－５Ｂ為沿ＶｃＡ?７３－＜Ｓ９Ｗ５?ＪＦ２??代純合子測序峰圖。??４８??

?廣東工業(yè)大學碩士學位論文???＾?ＷＴ?它?ｓｉ：ｄｋｅｙ－３０ｃｌ５．１７＿’－?Ｃ?對．４７３－５如７＿５．３乂??圖５－７基因ｓｉ？．儀印－鄧ｃ２５．／７、ｓｉＶｃＡ７３－５９Ｗ５．ｉ?Ｆ２代純合突變體與野生型斑馬魚外形對比??圖??Ｆｉｇ．５－７?Ｔｈｅ?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ａｐｐｅａｒａｎｃｅ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｇｅｎｅ?ｓｉ：ｄｋｅｙ－３０ｃｌ５．１７，??ｓｉ：ｃｈ７３－８９ｂｌ５．３?ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ?ｍｕｔａｎｔ?ａｎｄ?ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ?ｚｅｂｒａｆｉｓｈ??圖５－７Ａ、Ｂ、Ｃ分別為野生型斑馬魚、基因虻說ｅｙ－３０ｃ＾Ｊ７、基??代純合突變體外形對比圖；ＷＴ代表野生型斑馬魚，從？說印－劃“義廠７－代表??甿說�。悖椋担剩罚疲泊兒贤蛔凅w，甿ｃＡ７３－矽Ｗ５ＪＶ＿代表甿ｃ／？７３－卯Ｗ５．３?Ｆ２代純合突變??體。??５．４．６純合突變體的膽堿酯酶活性測定??為了進一步探宄這兩個斑馬魚膽堿酯酶樣基因５７Ｖ（ｆｅ＞＾０ｃ＿／５．ｉ７、５７＿：ｃＡ７３－５９Ｗ５．３??是否具有ＢＣｈＥ活性和ＡＣｈＥ活性，我們在篩選到基因此５Ｊ７、此ｃ／ｊ７３－＜５處／５．＿５??的純合子之后，將其單獨飼養(yǎng)至長大，分別隨機挑選１０只成魚和１０只野生型斑馬魚成??魚剖取腸、肝、腦、精巢、卵巢、心、腎組織并分別檢測ＢＣｈＥ和ＡＣｈＥ活性。由圖５－７??實驗結(jié)果可知：基因此？成ｅ＿ｙ－３０ｃｉ５．ｉ７、５７Ｖｃ／ｊ７３－卵Ｗ５．３純合子各個組織具有明顯膽堿酯??酶活性，與野生型斑馬魚對照組相比并沒有明顯差別。并且基因此？成ｅ＿ｙ－３０ｃｉ５．７７、??此－ＣＡ７３－卵Ｗ５Ｊ純合子實驗組中膽堿酯酶活性在各個

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]斑馬魚becn1基因的功能研究[D]. 段昆.西南大學 2016
[2]利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建斑馬魚lgalsla等9個基因的突變體[D]. 劉歡歡.山東大學 2015
[3]高血脂家兔丁酰膽堿酯酶和血脂的相關(guān)性研究[D]. 魏紅.華南理工大學 2015
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本文編號：3399526