盡管細胞DNA每天受到來自內(nèi)源和環(huán)境中一些因素的不斷攻擊,人體基因并未成為一堆亂碼信息或降解。為了應對這種威脅,生命體已經(jīng)發(fā)展了多種系統(tǒng)來檢測DNA損傷,發(fā)出信號并介導其修復,從而使人體能夠恢復DNA的完整性和保真度,并保持基因組的遺傳穩(wěn)定性。DNA修復途徑的破壞或失控會導致基因組不穩(wěn)定,因此,闡明DNA損傷修復的機制對于維持基因組穩(wěn)定性和遺傳信息的完整性至關重要。細胞周期進程和DNA損傷修復共同幫助細胞內(nèi)遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定。PALB2（Partner And Localizer Of BRCA2）是重要的乳腺癌抑制因子,作為BRCA2的協(xié)同因子,幫助BRCA2定位在DNA損傷位點。PALB2作為核心蛋白連接BRCA1和BRCA2,促進同源重組修復（HR）。RCC1（Regulator Of Chromosome Condensation 1）,染色質(zhì)濃縮調(diào)控因子1,與核小體上的H2A/H2B結(jié)合,參與S晚期和M早期的染色質(zhì)凝聚。DNA損傷應答（DDR）中許多損傷修復因子發(fā)揮作用和細胞周期進程依賴Ran-GTPase調(diào)節(jié)的核質(zhì)交換（NCT）,RCC1是Ran唯一的鳥嘌呤交換因子,與Ran結(jié)... 

【文章來源】：上海師范大學上海市

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

RCC1與PALB2內(nèi)源性相互作用

第2章RCC1可以與PALB2相互作用上海師范大學碩士學位論文26圖2-1RCC1與PALB2內(nèi)源性相互作用293T細胞裂解之后，向細胞裂解液中分別加入ProteinAAgarose或ProteinGAgarose，之后分別加入PALB2或者RCC1或者IgG抗體，4℃搖床孵育過夜進行內(nèi)源CoIP,并用PALB2、RCC1和β-actin抗體進行免疫印跡分析。圖2-2RCC1與PALB2外源性相互作用準備3盤293T細胞，一盤293T細胞轉(zhuǎn)染SBP-RCC1質(zhì)粒，培養(yǎng)24h后進行細胞裂解。向細胞裂解液中分別加入SProteinAgarose或ProteinGAgarose，向加入ProteinGAgarose的細胞裂解液加入IgG抗體，4℃搖床孵育過夜進行外源CoIP,并用PALB2抗體進行免疫印跡分析，F(xiàn)lag抗體檢測SBP-RCC1在細胞內(nèi)的表達情況。2.5本章小結(jié)之前的研究表明RCC1在細胞生理過程具有十分重要的作用。RCC1可以與Ran結(jié)合，促進Ran-GDP轉(zhuǎn)換成Ran-GTP，參與到有絲分裂細胞中染色體分離，有絲分裂紡錘體的形成，核質(zhì)間物質(zhì)運輸，核膜的重塑等生理過程。RCC1可以通過調(diào)節(jié)Ran-GTP水平調(diào)控細胞周期和DNA損傷反應。RCC1與核小體上的H2A/H2B結(jié)合，參與S晚期和M早期的染色質(zhì)凝聚。PALB2是同源重組修復中的關鍵蛋白,作為BRCA2的協(xié)同因子，幫助BRCA2定位在DNA損傷位點并且

第3章RCC1與PALB2相互作用的關鍵區(qū)域上海師范大學碩士學位論文30圖3-1RCC1缺失突變體示意圖表3-1缺失突變體及磷酸化位點突變引物序列RCC1-D1-FATGTCACCCAAGCGCATATCAGTGGAGGGCTCGGAGRCC1-D1-RCTCCGAGCCCTCCACTGATATGCGCTTGGGTGACATRCC1-D2-FGCCCTGGGAAGGGACACACAGGGCCAGCTAGGCCGTRCC1-D2-RACGGCCTAGCTGGCCCTGTGTGTCCCTTCCCAGGGCRCC1-D3-FACCTTGGGCTGCGGGGAATGGGTGGGCTTCTCTGGTRCC1-D3-RACCAGAGAAGCCCACCCATTCCCCGCAGCCCAAGGTRCC1-D4-FAATTCCACCAAGTCCTAGGTGGGCTTCTCTGGTRCC1-D4-RACCAGAGAAGCCCACCTAGGACTTGGTGGAATTRCC1-S2A-FTTCTGCAGTCGACGGATGGCACCCAAGCGCATAGCRCC1-S2A-RGCTATGCGCTTGGGTGCCATCCGTCGACTGCAGAARCC1-S11A-FCATAGCTAAAAGAAGGGCCCCCCCAGCAGATGCRCC1-S11A-RGCATCTGCTGGGGGGGCCCTTCTTTTAGCTATG


本文編號：3399261