枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）作為一種重要的革蘭氏陽性菌,在工業(yè)生物技術(shù)以及合成生物學(xué)領(lǐng)域被廣泛用于代謝工程、重組蛋白表達(dá)以及用作新型疫苗的運(yùn)載體,是一種極具應(yīng)用前景的新型合成生物學(xué)底盤。目前在B.subtilis中所使用的基因表達(dá)調(diào)控元件有限,主要是組成型或誘導(dǎo)型啟動子以及終止子等,高精準(zhǔn)性的人工調(diào)控工具較少,并且這類元件易受到底盤細(xì)胞內(nèi)源遺傳系統(tǒng)的干擾,影響基因線路的功能。因此亟待開發(fā)新的基因調(diào)控工具以充分挖掘B.subtilis在合成生物學(xué)中的應(yīng)用。RNA分子元件的調(diào)節(jié)不依賴底盤細(xì)胞自身的反式作用因子,因此具有良好的正交性,有較大的應(yīng)用潛力。本研究成功地在B.subtilis中構(gòu)建出了基于核酶和人工適體域的適體核酶分子開關(guān),實(shí)現(xiàn)了對外源基因的調(diào)控,并系統(tǒng)考察了這一元件在不同遺傳環(huán)境中的性能。具體研究結(jié)果如下:（1）以B.subtilis為宿主,驗(yàn)證曼氏血吸蟲錘頭狀核酶的功能,證明其可用性。據(jù)此構(gòu)建了表達(dá)質(zhì)粒pP43RZGFP,利用核酶調(diào)控報(bào)告基因GFP的表達(dá),檢測茶堿及DMSO對核酶功能的影響。結(jié)果顯示,含有核酶元件RZ的枯草芽胞菌株P(guān)BP43RZGFP表達(dá)G... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

茶堿結(jié)構(gòu)示意圖

圖 2-1 茶堿適體核酶調(diào)控基因表達(dá)原理示意圖Fig. 2-1 Schematic diagram of the regulatory function of theophylline aptazyme了進(jìn)一步探究茶堿適體核酶的調(diào)控性能，構(gòu)建了不同啟動子匹配茶堿核糖粒進(jìn)行功能分析和對比�；诓鑹A調(diào)控的核糖開關(guān)(圖 2-2)在未加入茶堿在莖環(huán)內(nèi)，核糖體無法結(jié)合 SD，基因無法進(jìn)行表達(dá)；加入茶堿配體后，發(fā)生改變，SD 被暴露出來，翻譯開始進(jìn)行。根據(jù)啟動子序列設(shè)計(jì)引物(表 pBSG11/pP43EGFP[32]為模板進(jìn)行全質(zhì)粒 PCR，替換啟動子 P43，測序驗(yàn)得含有不同啟動子與茶堿核糖開關(guān) E 組合匹配的重組質(zhì)粒 pPrpoBEGFP、pPspoVGEGFP、pPminCEGFP、pPsigWEGFP 和 pPyqeZEGFP。將轉(zhuǎn)入 B. subtilis 168 中，獲得含有茶堿核糖開關(guān)與不同啟動子組合匹配的基

圖 2-1 茶堿適體核酶調(diào)控基因表達(dá)原理示意圖Fig. 2-1 Schematic diagram of the regulatory function of theophylline aptazyme進(jìn)一步探究茶堿適體核酶的調(diào)控性能，構(gòu)建了不同啟動子匹配茶堿核進(jìn)行功能分析和對比�；诓鑹A調(diào)控的核糖開關(guān)(圖 2-2)在未加入茶堿莖環(huán)內(nèi)，核糖體無法結(jié)合 SD，基因無法進(jìn)行表達(dá)；加入茶堿配體后生改變，SD 被暴露出來，翻譯開始進(jìn)行。根據(jù)啟動子序列設(shè)計(jì)引物(BSG11/pP43EGFP[32]為模板進(jìn)行全質(zhì)粒 PCR，替換啟動子 P43，測序含有不同啟動子與茶堿核糖開關(guān) E 組合匹配的重組質(zhì)粒 pPrpoBFP、pPspoVGEGFP、pPminCEGFP、pPsigWEGFP 和 pPyqeZEGFP。入 B. subtilis 168 中，獲得含有茶堿核糖開關(guān)與不同啟動子組合匹配的

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)及其啟動子研究進(jìn)展[J]. 余小霞,田健,劉曉青,伍寧豐.  生物技術(shù)通報(bào). 2015(02)
[4]食品級枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)的最新研究進(jìn)展[J]. 王金斌,陳大超,李文,蔣瑋,李鵬,張倩倩,唐雪明.  上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2014(01)
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[10]納豆激酶基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)[J]. 黃志立,羅立新,凌均建,楊汝德,梁世中.  廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào). 2000(04)

博士論文
[1]新型耐熱普魯蘭酶的篩選、分子改良及固定化研究[D]. 王劍鋒.江南大學(xué) 2018

碩士論文
[1]Bacillus natto納豆激酶的重組表達(dá)及熱穩(wěn)定性改造[D]. 何孝天.江南大學(xué) 2014



本文編號：3318162