軟棗獼猴桃（Actinidia arguta）是我國珍貴的抗寒果樹之一,是獼猴桃品種改良的重要種質(zhì)資源,其果實富含Vc,營養(yǎng)豐富,是新興的珍貴果品。目前,其野生資源遭到嚴(yán)重破壞,天然基因庫受到威脅,而常規(guī)保存方法如異地保存與組織培養(yǎng)等易受環(huán)境及人為影響,保存能力有限,且占用資源大,因此,探索新的中長期保存方法具有重要意義。超低溫保存是目前最為理想且應(yīng)用最為廣泛的種質(zhì)資源長期保存的方法。本研究分別以軟棗獼猴桃休眠芽、莖尖和花粉為試材,研究了休眠芽玻璃化超低溫保存方法、組培苗莖尖小滴玻璃化超低溫保存方法和花粉的離體保存,旨在建立簡單、高效的軟棗獼猴桃種質(zhì)資源保存體系,以期為軟棗獼猴桃生產(chǎn)、育種和資源保存提供參考。1.建立了軟棗獼猴桃休眠芽玻璃化法超低溫保存體系�！G’單芽莖段最佳的滅菌方法是莖段去皮后用75%酒精浸泡30 s,無菌水洗滌4⁵次,然后用0.1%HgCl2滅菌30 min,無菌水洗滌4⁵次。滅菌后剝?nèi)⌒菝哐糠湃?.3 mol·L-1蔗糖+1 mol·L-1甘油的MS預(yù)培養(yǎng)液中震蕩培養(yǎng)2 d,常溫下用2 mol·L-1甘油+0.4 m... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

滅菌前不同單芽莖段處理方式及接種Fig.2-1Differentsingletreatmentmethodsofbudstemsandinoculationbeforesterilization

??誥テぶ校?虼嗣鵓?笨山?邪?テご?恚?休眠枝條不同處理方式的滅菌效果如表2-3所示。從表中可知，用0.1%HgCl2滅菌，帶皮莖段滅菌后接種的休眠芽的污染率均較高，在77.78%以上，最高可達(dá)90.56%，均顯著高于去皮莖段（最高27.42%）和裸露休眠芽（最高18.33%）滅菌組的污染率。通過比較去皮莖段和裸露休眠芽兩組之間的未污染芽成活率和總成活率可以看出，裸露休眠芽滅菌后未污染芽成活率最高僅為54.17%，總成活率最高為43.89%，均顯著低于去皮莖段各處理組。因此，去皮莖段的滅菌效果最佳。滅菌后休眠芽培養(yǎng)5天就開始萌發(fā)（圖2-2a），且均能發(fā)育為植株（圖2-2b）。圖2-2滅菌后休眠芽發(fā)育成活Fig.2-2Dormantbudsdevelopandsurviveaftersterilizationa滅菌后休眠芽萌發(fā)；b休眠芽發(fā)育為植株。aDormantbudsgerminateaftersterilization;bDormantbudsdevelopintoplants.2.2.1.2滅菌劑種類對滅菌效果的影響本試驗中去皮莖段和裸露休眠芽均采用0.1%HgCl2和5%NaClO兩種滅菌劑進行滅菌。滅菌相同時間，0.1%HgCl2滅菌組的污染率均低于5%NaClO滅菌組，且去皮莖段用0.1%HgCl2滅菌后的總成活率也較5%NaClO滅菌組高，說明用0.1%HgCl2滅菌的效果優(yōu)于用5%NaClO滅菌的

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章軟棗獼猴桃休眠芽玻璃化法超低溫保存技術(shù)研究152.2.2玻璃化法對凍后休眠芽成活率的影響2.2.2.1預(yù)培養(yǎng)液對超低溫保存后‘魁綠’休眠芽成活率的影響高濃度的蔗糖可誘導(dǎo)細(xì)胞脫水，從而增加細(xì)胞的抗凍能力，在培養(yǎng)液中也可加入冷凍保護劑DMSO、甘油等提高冷凍成活率（馮超紅，2014）。預(yù)培養(yǎng)液選擇蔗糖和甘油為滲透保護物質(zhì)，將休眠芽置于含不同濃度的蔗糖和甘油的MS預(yù)培養(yǎng)液中進行震蕩培養(yǎng)，結(jié)果如圖2-3所示。試驗結(jié)果表明，不同濃度蔗糖和甘油的預(yù)培養(yǎng)液對‘魁綠’休眠芽的成活率影響較大，隨著預(yù)培養(yǎng)液中蔗糖濃度的增加，休眠芽成活率呈下降趨勢。在0.3mol·L-1蔗糖和0.3mol·L-1蔗糖+1mol·L-1甘油的MS預(yù)培養(yǎng)液中培養(yǎng)的休眠芽成活率最高，分別為75.93%和84.72%，兩者之間無顯著差異。含0.7mol·L-1蔗糖和不同濃度甘油的MS預(yù)培養(yǎng)液中培養(yǎng)的休眠芽成活率均較低。分析結(jié)果表明蔗糖濃度是影響休眠芽成活率的主要因素，甘油作為滲透保護液起部分作用。含2mol·L-1甘油和不同濃度蔗糖的MS預(yù)培養(yǎng)液中培養(yǎng)的休眠芽成活率較低，可能原因是滲透保護物質(zhì)濃度較高，對休眠芽產(chǎn)生了滲透脅迫，破壞了細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使一部分細(xì)胞失去活力。圖2-3不同預(yù)培養(yǎng)液對凍后休眠芽成活率的影響Fig.2-3Effectofdifferentpreculturedfluidsonsurvivalrateofdormantbudsaftercryopreservation不同字母表示在0.05水平上差異顯著。下同。Differentlettersindicatesignificantdifferenceatthe0.05level.Thesamebelow.2.2.2.2預(yù)培養(yǎng)時間對超低溫保存后‘魁綠’休眠芽成活率的影響張延紅（2013）研究表明，預(yù)培養(yǎng)可以改善植物材料的生理狀態(tài)，一定時間的預(yù)培養(yǎng)有利于提高保存材料的成活率。研究發(fā)現(xiàn)，預(yù)培養(yǎng)不同時間超低溫保存后休眠芽的成活率存在差異?


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