MADS-box轉(zhuǎn)錄因子家族是植物中研究最為深入的基因家族之一,在植物的成花誘導(dǎo)、花器官發(fā)育、休眠及果實(shí)發(fā)育等生物學(xué)過程中發(fā)揮著極其重要的作用。DAM基因?qū)儆贛ADS-box基因家族,與擬南芥中的SVP/AGL24類MADS-box基因同源。目前,DAM基因?qū)麡溲啃菝叩恼{(diào)控機(jī)制已有一些研究,在不同的多年生溫帶果樹如桃、梨、蘋果、梅和獼猴桃中進(jìn)行了克隆分離并進(jìn)行表達(dá)分析及功能鑒定。雖然前人已經(jīng)通過同源克隆的方法獲得3個梨DAM基因,但是,對其的研究主要集中在表達(dá)模式分析方面,缺乏功能驗(yàn)證,因此有必要對梨DAM基因展開更全面的研究。本研究通過系統(tǒng)進(jìn)化分析和共線性分析獲得了 5個梨DAM基因,并對其進(jìn)行了表達(dá)分析、互作分析及功能驗(yàn)證等。主要結(jié)果如下:1、梨MADS-box基因家族的鑒定在’碭山酥梨’基因組中共鑒定了 100個MADS-box基因家族成員,通過系統(tǒng)進(jìn)化分析可將其分為17個進(jìn)化枝。共線性分析表明梨在30-45百萬年前經(jīng)歷的全基因組復(fù)制事件促進(jìn)了 MADS-box基因家族成員的擴(kuò)張。不同的MADS-box基因在梨果實(shí)發(fā)育和梨芽休眠過程中的表達(dá)模式差異較大,扮演著不同的角色。2、梨... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
縮略語表
1 緒論
    1.1 多年生樹木芽休眠研究進(jìn)展
        1.1.1 碳水化合物代謝
        1.1.2 激素代謝
        1.1.3 環(huán)境響應(yīng)相關(guān)基因
        1.1.4 表觀遺傳調(diào)控
    1.2 Dormancy-associated MADS-box(DAM)與SVP同源基因的研究進(jìn)展
        1.2.1 DAM同源基因在李屬植物中的研究進(jìn)展
        1.2.2 DAM與SVP同源基因在蘋果族植物中的研究進(jìn)展
        1.2.3 DAM與SVP同源基因在非薔薇科植物中的研究進(jìn)展
    1.3 可變剪接的分子機(jī)制
    1.4 立題依據(jù)及研究內(nèi)容
2 梨MADS-box基因家族分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 梨MADS-box基因家族鑒定及染色體定位
        2.1.2 梨MADS-box基因家族系統(tǒng)進(jìn)化分析
        2.1.3 共線性分析
        2.1.4 轉(zhuǎn)錄組分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 梨MADS-box基因的鑒定、染色體定位及共線性分析
        2.2.2 梨MADS-box基因家族系統(tǒng)進(jìn)化分析
        2.2.3 梨MADS-box基因家族的時空表達(dá)分析
            2.2.3.1 梨MADS-box基因家族在果實(shí)發(fā)育過程中的表達(dá)分析
            2.2.3.2 梨MADS-box基因在休眠過程中的表達(dá)分析
    2.3 討論
3 梨DAM基因的克隆及分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 試驗(yàn)方法
            3.1.2.1 桃、梨基因組共線性分析
            3.1.2.2 RNA提取
            3.1.2.3 逆轉(zhuǎn)錄
            3.1.2.4 DAM基因的克隆及分析
            3.1.2.5 實(shí)時熒光定量PCR
            3.1.2.6 酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)(Y2H)
            3.1.2.7 雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)(BiFC)
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 梨DAM基因的鑒定
        3.2.2 梨DAM基因的克隆及序列分析
        3.2.3 梨DAM基因的蛋白互作分析
        3.2.4 梨DAM基因的時空表達(dá)分析
            3.2.4.1 梨DAM基因在梨芽休眠進(jìn)程的表達(dá)分析
            3.2.4.2 梨DAM基因在梨開花過程的表達(dá)分析
    3.3 討論
4 梨DAM基因的功能驗(yàn)證
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 試驗(yàn)方法
            4.1.2.1 載體構(gòu)建
            4.1.2.2 擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化
            4.1.2.3 擬南芥種子的篩選
            4.1.2.4 DNA提取及PCR檢測
            4.1.2.5 RNA提取,逆轉(zhuǎn)錄及qRT-PCR
            4.1.2.6 種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)及ABA處理的種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 獲得陽性轉(zhuǎn)基因擬南芥
        4.2.2 DAM基因?qū)M南芥生長發(fā)育的影響
        4.2.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)
    4.3 討論
5 梨DAM基因可變剪接的初步研究
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗(yàn)材料
        5.1.2 試驗(yàn)方法
            5.1.2.1 DAM基因可變剪接的克隆及序列分析
            5.1.2.2 RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄及實(shí)時熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)
            5.1.2.3 酵母雙雜實(shí)驗(yàn)及雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)
            5.1.2.4 擬南芥轉(zhuǎn)基因及檢測
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 PpyMADS31基因可變剪接的研究
            5.2.1.1 PpyMADS31基因的克隆及序列分析
            5.2.1.2 PpyMADS31剪接異構(gòu)體的表達(dá)分析
            5.2.1.3 PpyMADS31剪接異構(gòu)體的蛋白互作
            5.2.1.4 PpyMADS31剪接異構(gòu)體的功能驗(yàn)證
        5.2.2 PpyMADS71基因可變剪接的研究
            5.2.2.1 PpyMADS71基因的克隆及序列分析
            5.2.2.2 PpyMADS71剪接異構(gòu)體的蛋白互作
            5.2.2.3 PpyMADS71剪接異構(gòu)體的功能驗(yàn)證
    5.3 討論
6 小結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]梨屬植物分類的歷史回顧及新進(jìn)展[J]. 滕元文,柴明良,李秀根.  果樹學(xué)報. 2004(03)
[2]木本植物休眠的誘導(dǎo)因子及其細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平的調(diào)節(jié)作用[J]. 簡令成,盧存福,鄧江明,李積宏,LIPaul H.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報. 2004(01)
[3]影響落葉果樹芽休眠的因素[J]. 李憲利,袁志友,高東升.  山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2001(03)

博士論文
[1]梨花芽休眠轉(zhuǎn)換的分子網(wǎng)絡(luò)及調(diào)控機(jī)制[D]. 牛慶豐.浙江大學(xué) 2016
[2]梨休眠分子生理機(jī)制研究[D]. 劉國琴.浙江大學(xué) 2013
[3]七月酥梨休眠期內(nèi)含物變化及生理代謝研究[D]. 畢磊.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]砂梨休眠期花芽碳水化合物代謝及相關(guān)基因表達(dá)研究[D]. 鄭鵬華.浙江大學(xué) 2013



本文編號：3200233