大豆（Glycine max）是中國重要的農(nóng)作物之一,大豆皂苷是其重要的次生代謝產(chǎn)物之一。隨著對大豆皂苷研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)皂苷有諸多對人體有益的功能,因此越來越受到人們的重視。但對大豆皂苷合成代謝機制研究較少。本實驗以山西72份大豆種質資源為材料,采用高效液相色譜法（High performance liquid chromatography,HPLC）對72份大豆材料種子中大豆皂醇含量進行了測定,分析了不同材料中大豆皂醇組成和含量的差異,評價了不同粒重、種皮顏色和生態(tài)類型大豆材料中大豆皂醇含量的差異性。選取大豆皂苷含量不同的大豆材料采用高效液相-電噴霧離子化串聯(lián)質譜聯(lián)用技術（High performance liquid-electrospray ionization tandem mass spectrometry technology,HPLC-ESI-MS/MS）對籽粒發(fā)育過程中大豆皂苷的積累規(guī)律進行了研究,并進行轉錄組測序,篩選出參與大豆皂苷代謝的差異表達基因。利用qRT-PCR技術分析了大豆籽粒發(fā)育過程中以及不同組織中差異表達基因表達模式。本實驗從轉錄組和代謝組水平上探究... 

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
第一章 前言
    1.1 引言
    1.2 大豆皂苷簡介
        1.2.1 大豆皂苷組成與分類
        1.2.2 大豆皂苷的分布特征
        1.2.3 大豆皂苷的合成代謝途徑
        1.2.4 大豆皂苷的檢測方法
    1.3 轉錄組測序技術研究進展
    1.4 本研究的目的和意義
    1.5 技術路線
第二章 不同材料大豆皂醇含量分析
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 大豆皂苷的提取
        2.2.2 大豆皂苷的水解
        2.2.3 大豆皂醇的檢測
        2.2.4 標準工作曲線
        2.2.5 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結果與分析
        2.3.1 HPLC法分析大豆皂醇含量
        2.3.2 不同粒重類型大豆皂醇含量分析
        2.3.3 不同種皮顏色大豆材料皂醇含量分析
        2.3.4 野生、半野生、栽培大豆材料皂醇含量分析
        2.3.5 大豆皂醇含量與籽粒性狀的相關分析
        2.3.6 不同組織中大豆皂醇含量分析
    2.4 小結與討論
第三章 轉錄組測序鑒定大豆皂苷代謝關鍵酶基因
    3.1 材料與試劑
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 取材
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 大豆皂苷的提取
        3.2.2 大豆皂苷的測定
        3.2.3 轉錄組測序
    3.3 結果與分析
        3.3.1 HPLC-ESI-MS/MS分析不同時期大豆籽粒皂苷含量
        3.3.2 轉錄組數(shù)據(jù)分析
    3.4 小結與討論
第四章 大豆GmHMGR1基因的克隆及表達分析
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 材料
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 引物設計
        4.2.2 RNA提取
        4.2.3 DNA提取
        4.2.4 cDNA的合成
        4.2.5 PCR反應體系
        4.2.6 qRT-PCR反應
        4.2.7 測序
        4.2.8 基因序列生物信息學分析
    4.3 結果與分析
        4.3.1 DNA與RNA質量檢測
        4.3.2 GmHMGR1基因的克隆
        4.3.3 GmHMGR1 DNA及cDNA序列分析
        4.3.4 GmHMGR1蛋白質結構分析
        4.3.5 GmHMGR1蛋白質同源性分析
        4.3.6 GmHMGR1基因系統(tǒng)進化分析
        4.3.7 GmHMGR1基因表達分析
        4.3.8 βAS基因表達分析
        4.3.9 UGT73B5基因表達分析
    4.4 小結與討論
第五章 全文總結
參考文獻
Abstract
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同大豆品種大豆皂苷組成分析[J]. 岳愛琴,王衛(wèi)東,徐海軍,王敏,郭春絨,趙晉忠,杜維俊.  中國糧油學報. 2017(05)
[2]絞股藍法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及其序列分析[J]. 蔣東,唐銀琳,陶晨陳,吳耀生.  生物技術通訊. 2014(02)
[3]甘草HMGR基因cDNA的克隆及功能鑒定（英文）[J]. 劉穎,許巧仙,席培宇,陳宏昊,劉春生.  藥學學報. 2013(05)
[4]人參皂苷合成生物學關鍵元件HMGR基因克隆與表達分析[J]. 羅紅梅,宋經(jīng)元,李雪瑩,孫超,李春芳,駱翔,李瀅,陳士林.  藥學學報. 2013(02)
[5]大豆皂甙對人肝癌細胞QGY-7703的生長抑制作用研究[J]. 黃進,張民,李忠,牛雯,張聲華.  營養(yǎng)學報. 2004(06)

碩士論文
[1]人參βAS基因的表達調控與功能分析[D]. 曹豪杰.吉林大學 2013
[2]一個中國南方野生大豆基因組深度測序及其分析[D]. 李澤鋒.浙江大學 2012



本文編號：3665102