蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis,簡稱Bt）是一種革蘭氏陽性細菌,它在生長過程中會形成芽胞和晶體,晶體蛋白具有殺蟲作用,因為晶體的殺蟲效果好,安全,高效等優(yōu)點而逐漸成為了廣泛使用的微生物殺蟲劑。由蘇云金芽胞桿菌生產(chǎn)的Bt制劑和轉(zhuǎn)Bt作物對鱗翅目（Lepidoptera）和鞘翅目（Coleoptera）等害蟲具有很好的防治效果,在害蟲控制方面取得了巨大的成功。目前已知高效商業(yè)化菌株KN11對美國白蛾具有很好的殺蟲活性,已知該菌株具有cry1Aa、cry1Ac、cry1Ca、cry1Da四種殺蟲基因。為明確菌株KN11功能特性,進一步挖掘其殺蟲性能潛力,本研究在常規(guī)形態(tài)觀察、SDS-PAGE分析的基礎(chǔ)上采用基因組高通量測序技術(shù),對菌株KN11進行了基因組分析,包括基因的注釋和預(yù)測,全基因組比較,更充分地鑒定殺蟲基因,在基因組分析的基礎(chǔ)上對殺蟲蛋白進行了分析,結(jié)果如下:KN11營養(yǎng)生長狀態(tài)的細胞為長桿狀,芽胞為長卵形,晶體數(shù)量較多,為雙錐形。SDS-PAGE分析結(jié)果顯示KN11主要殺蟲蛋白分子量約為130kD與60kD。切取SDS-PAGE主要蛋白條帶,進行胰蛋白酶...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 蘇云金芽胞桿菌
        1.1.1 殺蟲晶體蛋白基因的命名
        1.1.2 殺蟲晶體蛋白的作用機理
        1.1.3 殺蟲晶體蛋白的質(zhì)譜鑒定
        1.1.4 蘇云金芽胞桿菌商業(yè)化及KN11簡介
    1.2 微生物基因組學(xué)
        1.2.1 基因組及基因組學(xué)
        1.2.2 微生物基因組學(xué)及應(yīng)用
        1.2.3 蘇云金芽胞桿菌基因組
    1.3 高通量測序技術(shù)簡介
        1.3.1 高通量測序技術(shù)的歷史及發(fā)展
        1.3.2 高通量測序技術(shù)的優(yōu)點
        1.3.3 高通量測序基因的拼接方法
    1.4 高通量測序技術(shù)在蘇云金芽孢桿菌中的應(yīng)用
        1.4.1 GO功能注釋和基因預(yù)測
        1.4.2 比較基因組學(xué)
        1.4.3 Blast比對本地數(shù)據(jù)庫和聚類分析
    1.5 商業(yè)菌株KN11的生物活性測試
    1.6 本研究的目的與意義
    1.7 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 實驗材科
        2.1.1 菌株
        2.1.2 培養(yǎng)基與抗生素
        2.1.3 酶與生化試劑
        2.1.4 常用溶液和緩沖液
    2.2 儀器設(shè)備
    2.3 軟件或平臺
    2.4 研究方法
        2.4.1 菌株的形態(tài)學(xué)鑒定
        2.4.2 KN11殺蟲蛋白的SDS-PAGE分析
        2.4.3 KN11菌株蛋白質(zhì)譜
        2.4.4 KN11基因組高通量測序拼接
        2.4.5 KN11基因組生物信息學(xué)分析
        2.4.6 菌株KN11的防治效果
3 結(jié)果與分析
    3.1 菌株的形態(tài)學(xué)鑒定
    3.2 KN11殺蟲蛋白的SDS-PAGE分析
    3.3 KN11菌株蛋白質(zhì)譜分析
    3.4 KN11菌株基因組簡要分析
        3.4.1 KN11基因組提取
        3.4.2 KN11基因組測序
        3.4.3 KN11基因組拼接組裝
        3.4.4 KN11基因組注釋與預(yù)測
        3.4.5 菌株KN11基因組比較分析
        3.4.6 菌株KN11編碼殺蟲基因情況
    3.5 菌株KN11的防治效果
4 討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：4040603