G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)Latrophilin(LPH)不僅涉及人類與哺乳動(dòng)物的多動(dòng)癥、精神分裂癥及成癮等精神疾病的發(fā)生,還涉及到對(duì)外源蛛毒素的信號(hào)傳遞及多種藥物的敏感性。目前關(guān)于LPH受體在昆蟲中的功能和信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制尚不清楚。本研究首先在21種動(dòng)物中對(duì)LPH進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化分析,結(jié)果顯示,lph是由一個(gè)共同祖先基因衍化而來(lái),但是lph分別在脊椎動(dòng)物、頭索動(dòng)物、尾索動(dòng)物和昆蟲中發(fā)生了獨(dú)立的進(jìn)化。lph基因在脊椎動(dòng)物中發(fā)生了復(fù)制,產(chǎn)生了 3個(gè)拷貝(lph-1,lph-2和lph-3);鳥類、尾索動(dòng)物、頭索動(dòng)物中也發(fā)生了基因復(fù)制事件只存在lph-2和lph-3。線蟲中有兩個(gè)拷貝,分別對(duì)應(yīng)于脊椎動(dòng)物lph-1和lph-2;然而,lph基因在昆蟲只有一個(gè)拷貝。這些物種的lph雖然起源與一個(gè)共同祖先基因,但是卻發(fā)生了復(fù)雜的分化,暗示其在這些物種中可能發(fā)生了功能分化。為了研究LPH在赤擬谷盜生長(zhǎng)發(fā)育中的調(diào)控作用,我們克隆了其Tclph基因,發(fā)現(xiàn)該基因在赤擬谷盜中存在3種選擇性拼接形式Tclpha,Tclphb和Tclphc。為了進(jìn)一步研究赤擬谷盜中這3種剪接本的作用,我們分別敲減了三種剪接本特異區(qū)...

【文章頁(yè)數(shù)】：124 頁(yè)

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 昆蟲G蛋白偶聯(lián)受體研究進(jìn)展
    1.2 Latrophilin的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 LPH的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 LPH的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 LPH表達(dá)模式的研究
        1.2.4 LPH配體的研究進(jìn)展
        1.2.5 LPH生物學(xué)功能
    1.3 轉(zhuǎn)錄組學(xué)在昆蟲研究中的應(yīng)用
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄組學(xué)的概念
        1.3.2 RNA-seq技術(shù)的原理及技術(shù)流程
        1.3.3 轉(zhuǎn)錄組學(xué)的優(yōu)勢(shì)
        1.3.4 RNA-seq的應(yīng)用
    1.4 本研究的目的和意義
第2章 赤擬谷盜蛛毒素受體LPH的鑒定及功能分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 LPH的鑒定及進(jìn)化分析
        2.1.5 引物設(shè)計(jì)
        2.1.6 提取總RNA
        2.1.7 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        2.1.8 lph全長(zhǎng)cDNA克隆
        2.1.9 lph不同發(fā)育時(shí)期、組織表達(dá)模式分析
        2.1.10 dsRNA合成
        2.1.11 dsRNA的注射
        2.1.12 赤擬谷盜產(chǎn)卵量和孵化率統(tǒng)計(jì)
        2.1.13 赤擬谷盜成蟲組織的解剖和拍照
        2.1.14 lph下游的基因檢測(cè)
        2.1.15 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 赤擬谷盜LPH的鑒定
        2.3.2 LPH系統(tǒng)發(fā)育及同線性分析
        2.3.3 赤擬谷盜lph基因的時(shí)空表達(dá)模式
        2.3.4 RNAi表型分析
        2.3.5 赤擬谷盜lph信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的分析
    2.4 討論
第3章 lph通過ACh通路調(diào)控赤擬谷盜藥物敏感性
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
        3.2.4 總RNA提取
        3.2.5 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        3.2.6 組織表達(dá)模式分析
        3.2.7 dsRNA合成
        3.2.8 dsRNA的注射
        3.2.9 藥物敏感性檢測(cè)
        3.2.10 ChAT、AChE和ACh含量檢測(cè)
        3.2.11 數(shù)據(jù)處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 赤擬谷盜lph基因的幼蟲組織表達(dá)模式
        3.3.2 RNA干擾lph增加赤擬谷盜對(duì)殺蟲劑的敏感性
        3.3.3 殺蟲劑誘導(dǎo)lph基因表達(dá)
        3.3.4 敲減lph分別抑制和促進(jìn)chat及ace-1表達(dá)
        3.3.5 干擾lph分別降低和增加ChAT及AChE的酶活水平
        3.3.6 敲減lph降低ACh含量
    3.4 討論
第4章 赤擬谷盜lph基因調(diào)控信號(hào)通路探究
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.4 RNAi
        4.2.5 總RNA提取和Illumina測(cè)序
        4.2.6 數(shù)據(jù)質(zhì)控分析
        4.2.7 Reads在參考基因組和注釋基因上的分布分析
        4.2.8 基因表達(dá)量分析和差異基因表達(dá)分析
        4.2.9 GO (Gene Ontology)功能顯著性富集分析
        4.2.10 Pathway顯著性富集分析
        4.2.11 qRT-PCR驗(yàn)證測(cè)序數(shù)據(jù)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 Illumina測(cè)序結(jié)果比對(duì)到赤擬谷盜基因組
        4.3.2 基因表達(dá)量分析
        4.3.3 注釋所有檢測(cè)到的基因
        4.3.4 DEGs的鑒定
        4.3.5 DEGs的功能分析
    4.4 討論
第5章 lph調(diào)控est4和est6參與赤擬谷盜藥物敏感性和生殖過程
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
        5.2.4 總RNA提取
        5.2.5 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        5.2.6 ests不同發(fā)育時(shí)期、組織表達(dá)模式分析
        5.2.7 dsRNA合成
        5.2.8 dsRNA的注射
        5.2.9 赤擬谷盜產(chǎn)卵量和孵化率統(tǒng)計(jì)
        5.2.10 藥物敏感性檢測(cè)
        5.2.11 赤擬谷盜成蟲組織的解剖和拍照
        5.2.12 數(shù)據(jù)處理
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 赤擬谷盜lph下游基因est4和est6的時(shí)空表達(dá)模式
        5.3.2 殺蟲劑處理對(duì)誘導(dǎo)est4和est6表達(dá)
        5.3.3 敲減est4和est6增加殺蟲劑敏感性
        5.3.4 殺蟲劑處理dslph昆蟲分別促進(jìn)和抑制est4和est6的表達(dá)
        5.3.5 lph分別正調(diào)控和負(fù)調(diào)控est4和est6的表達(dá)
        5.3.6 RNA干擾est6和lph基因降低雌蟲的產(chǎn)卵量和卵的孵化率
        5.3.7 敲低est6和lph基因影響卵巢發(fā)育和卵的尺寸
    5.4 討論
第6章 總結(jié)
    6.1 研究主要結(jié)論
    6.2 論文主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)
    6.3 論文不足之處
參考文獻(xiàn)
在讀期間已/待發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果
致謝



本文編號(hào)：3869838