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高通量檢測花生油酸含量相關基因AhFAD2等位變異的方法

發(fā)布時間:2017-06-26 02:20

  本文關鍵詞:高通量檢測花生油酸含量相關基因AhFAD2等位變異的方法,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】:花生(Arachis hypogaea)Δ12脂肪酸去飽和酶基因(Δ12fatty acid desaturase,Ah FAD2A和Ah FAD2B)是決定花生籽粒油酸含量和高油酸亞油酸比值(oleic acid/linoleic acid,O/L)的關鍵基因,高油酸花生品種中這2個基因均發(fā)生突變。針對普通油酸花生和高油酸花生Ah FAD2A 448位G/A差異和Ah FAD2B 442位A堿基的插入/缺失(insertion-deletion,In Dels)等位差異,已開發(fā)了包括酶切擴增多態(tài)性序列法(cleaved amplified polymorphic sequence,CAPS)和等位基因特異PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)等多種檢測的標記和檢測方法。本研究針對上述2個SNP位點,開發(fā)了可進行高通量檢測的實時定量PCR引物、Taq Man探針和檢測技術,該方法檢測效率和準確率均很高。本研究還開發(fā)了更為經(jīng)濟和高效的競爭性等位基因特異性PCR(kompetitive allele specific PCR,KASP)引物和檢測方法。利用開發(fā)的Taq Man探針檢測方法和KASP方法檢測了14個花生品種和高油酸選育回交組合BC2F1和BC1F2群體部分種子的基因型,并比較了兩種方法檢測結果的一致率,發(fā)現(xiàn)這兩種方法檢測Ah FAD2B 442 nt A/-In Del差異結果的一致率高達96.7%;而針對Ah FAD2A 448位G/A差異位點檢測一致率僅為71.7%。本研究還比較了目前常用的CAPS、AS-PCR、測序法、Taq Man探針法及KASP方法的優(yōu)缺點,對相關方法的應用前景進行了討論。本研究涉及的高通量檢測方法可有效地輔助高油酸品種的選育,極大地提高了目標性狀選擇的準確性和效率。
【作者單位】: 山東省農(nóng)業(yè)科學院生物技術研究中心/山東省作物遺傳改良與生理生態(tài)重點實驗室;山東省濰坊市農(nóng)業(yè)科學院;山東大學農(nóng)學院;
【關鍵詞】花生脂肪酸去飽和酶基因(AhFAD) 等位變異 油酸 檢測方法 花生
【基金】:國家自然科學基金(No.31201272) 山東省農(nóng)業(yè)良種工程(No.2014-2016) 瑪氏集團巧克力事業(yè)部全球花生可持續(xù)發(fā)展計劃
【分類號】:S565.2
【正文快照】: 花生(Arachis hypogaea)籽粒脂肪酸的組成是衡量花生品質(zhì)的重要指標。高油酸亞油酸比值(oleicacid/linoleic acid,O/L)的花生及其制品不易氧化和腐敗,貨架期較長。有研究表明,烘焙后的高油酸花生較普通油酸含量花生貯存期延長8倍(Mozin-go et al.,2004);而高油酸花生壓榨的花

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