為研究NO對乳腺癌細(xì)胞遷移能力的影響及其分子機(jī)制,本研究首先用梯度濃度NO供體SNP處理乳腺癌細(xì)胞MCF-7,MTT法檢測細(xì)胞活性,發(fā)現(xiàn)高濃度SNP抑制細(xì)胞增殖;PI-AnnexinV和Hoechst細(xì)胞核染色檢測結(jié)果顯示,高濃度NO促進(jìn)細(xì)胞凋亡.用低濃度SNP處理細(xì)胞,劃痕愈合及小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,低濃度SNP促進(jìn)細(xì)胞遷移;RT-qPCR和Westernblot結(jié)果顯示,低濃度SNP上調(diào)轉(zhuǎn)錄調(diào)控輔因子MRTF-A及其下游的遷移相關(guān)基因MYL9、MYH9和CYR61的表達(dá).在MCF-7細(xì)胞敲低NOS2基因同樣導(dǎo)致MRTF-A、MYL9、MYH9及CYR61表達(dá)下降;敲低MRTF-A則SNP不再促進(jìn)上述遷移相關(guān)基因的表達(dá).以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:NO的腫瘤生物學(xué)效應(yīng)與NO濃度密切相關(guān),細(xì)胞內(nèi)源性或外源性低濃度NO可能通過刺激遷移相關(guān)基因表達(dá)而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移,而MRTF-A參與了NO誘導(dǎo)的遷移相關(guān)基因表達(dá).

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【部分圖文】：

圖1 SNP處理后細(xì)胞培養(yǎng)基中NO含量測定

為了確定SNP作為細(xì)胞外NO供體的有效性，利用Griess法檢測加SNP24h后培養(yǎng)基中NO含量，結(jié)果如圖1所示．與未加藥組相比，不同濃度SNP均可以釋放NO，且NO含量隨著加入SNP濃度升高而增加，確定了SNP作為NO供體藥物的有效性．為觀察SNP對MCF-7細(xì)胞活性的影響....

圖2 SNP對MCF-7細(xì)胞增殖的影響

為觀察SNP對MCF-7細(xì)胞活性的影響，進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖2所示．當(dāng)SNP濃度低于0.5mmol/L時(shí)，對MCF-7細(xì)胞活性無顯著抑制；但SNP濃度高于0.5mmol/L時(shí)，活細(xì)胞數(shù)量明顯下降．這表明高濃度NO抑制MCF-7細(xì)胞增殖．2.2高濃度NO對MCF-7細(xì)胞凋....

圖3 高濃度SNP對MCF-7細(xì)胞凋亡的影響

為了進(jìn)一步確定SNP誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡，采用Hoechst染色觀察高濃度SNP對細(xì)胞核形態(tài)的影響，結(jié)果如圖4所示．圖4Hoechst染色觀察細(xì)胞核內(nèi)DNA聚集狀態(tài)

圖4 Hoechst染色觀察細(xì)胞核內(nèi)DNA聚集狀態(tài)

圖3高濃度SNP對MCF-7細(xì)胞凋亡的影響用1mmol/L或2mmol/LSNP處理后，MCF-7細(xì)胞核明顯皺縮，DNA在核膜下聚集并出現(xiàn)“冒狀”結(jié)構(gòu)，提示細(xì)胞凋亡發(fā)生．Hoechst染色結(jié)果和PI-AnnexinV檢測結(jié)果一致，證實(shí)NO供體SNP濃度高于0.5mmo....

本文編號：4013199