NaD1(Nicotiana alata Defensin 1)蛋白是一種在花煙草(Nicotiana alata)花中發(fā)現(xiàn)的植物防御素。其對多種植物病原菌及人類病源性真菌具有抗性,同時還具有撕裂癌細胞的功能,在植物學和醫(yī)學研究中均具有重要的價值。本研究以花煙草為材料克隆NaD1基因并進行深入研究,取得如下結果:1.NaD1基因克隆及結構分析根據已經報道的NaD1基因序列,提取mRNA反轉cDNA,利用同源克隆法克隆花煙草NaD1基因編碼序列進行克隆,分析表明該序列長為318 bp,與已知的NaD1基因編碼序列的同源性為100%。該基因共編碼105個氨基酸,其中丙氨酸(A)含量最高(12.4%),谷氨酸(E)含量次之(10.7%),其他氨基酸含量相對較低。分析發(fā)現(xiàn)NaD1為不穩(wěn)定的疏水性蛋白,相對分子質量為11.7kD,理論等電點pI為6.56,具有信號肽(第4-21位氨基酸)、跨膜結構及多個磷酸化位點;其二級結構中3個ɑ-螺旋及1個β-折疊,符合植物防御素的結構特征。利用同源克隆技術,以花煙草基因組DNA為模板,克隆了NaD1基因的基因組DNA序列,分析表明其大小為514 bp,包含...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻綜述
    1 前言
    2 NaD1蛋白簡介
        2.1 NaD1蛋白編碼基因克隆及蛋白結構研究
        2.2 NaD1蛋白的作用及作用機制
    3 內含子
        3.1 內含子的分類
        3.2 內含子的功能
    4 真核生物啟動子
        4.1 真核生物啟動子的組成
        4.2 啟動子的克隆方法
        4.3 啟動子的研究方法
    5 本研究的目的及意義
第二章 花煙草NaD1基因的克隆及結構分析
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
        2.2 主要試劑與儀器設備
        2.3 引物
        2.4 試驗方法
    3 結果與分析
        3.1 NaD1基因全長編碼序列克隆
        3.2 NaD1基因生物信息學分析
        3.3 NaD1基因dna序列克隆
        3.4 NaD1基因的基因結構及內含子序列分析
        3.5 NaD1基因啟動子片段克隆
        3.6 NaD1基因啟動子的轉錄起始位點及順式作用元件的預測
        3.7 NaD1基因啟動子轉錄活性驗證
    4 討論
第三章 NaD1基因在花煙草不同器官中的表達研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
        2.2 主要試劑與儀器設備
        2.3 引物
        2.4 試驗方法
    3 結果與分析
        3.1 熒光定量pcr引物的篩選
        3.2 NaD1基因在花煙草不同器官中的表達分析
    4 討論
第四章 結論、創(chuàng)新點與研究展望
    1 結論
    2 創(chuàng)新點
    3 研究展望
參考文獻
附錄一
附錄二
致謝



本文編號：4000675