水稻是我國重要的糧食作物之一,其穩(wěn)定確保國家糧食的安全生產(chǎn)。但是土壤的干旱、水稻病蟲害、除草劑等因素都會嚴重制約水稻的產(chǎn)量,同時也不同程度的影響著水稻的品質(zhì)。為此,構(gòu)建出一個多基因植物表達載體,通過多基因載體的遺傳轉(zhuǎn)化,獲得包含高產(chǎn)、抗逆、抗蟲、抗病等特性的水稻新材料是確保國家糧食安全生產(chǎn)的一種有效途徑。本研究以實驗室已有的遺傳轉(zhuǎn)化體系為基礎(chǔ),進一步通過改善和優(yōu)化培養(yǎng)條件,期望獲得一種更為快速且高效的多基因遺傳轉(zhuǎn)化體系。研究以秈稻明恢86為受體材料,將事先構(gòu)建好的含作物高產(chǎn)基因RRM2,耐旱基因HS1,抗除草劑基因EPSPS,抗蟲基因BT,凋亡抑制基因IAP和P35等基因的多基因載體(載體分別命名為P5和P8),進行遺傳轉(zhuǎn)化。本研究主要結(jié)果如下:1、在相同的誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下,通過對明恢86的幼胚和成熟胚進行誘導(dǎo),結(jié)果表明:明恢86幼胚中誘導(dǎo)出的愈傷組織結(jié)構(gòu)好,愈傷組織亮黃、碩大,生長旺盛,出愈率高。明恢86成熟胚中誘導(dǎo)出的愈傷組織質(zhì)地、結(jié)構(gòu)較小,愈傷組織生長較為緩慢,出愈率比較低。2、通過篩選劑草甘膦和篩選劑G418對愈傷組織進行不同的篩選濃度的梯度篩選,結(jié)果表明:明恢86愈傷組織在篩選...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同外植體在相同培養(yǎng)條件下，愈傷組織的生長狀態(tài)、出愈率有較大的差異。??實驗采用明恢８６的成熟胚和幼胚來誘導(dǎo)愈傷組織，將明恢８６的幼胚和成熟胚每??次誘導(dǎo)１００個，做３次重復(fù)實驗。幼胚（圖３－１?ａ）在培養(yǎng)基上誘導(dǎo)２－３天左右，??就能長出愈傷組織，可以看到愈傷組織顏色淡黃，質(zhì)地....

培養(yǎng)和２８°Ｃ黑暗培養(yǎng)，培養(yǎng)時間同樣是１４天。培養(yǎng)過程中每次接５７個篩選愈??傷，每個培養(yǎng)條件做３次重復(fù)實驗。結(jié)果表明，２８°Ｃ光照培養(yǎng)條件下的愈傷組織??出現(xiàn)褐化的現(xiàn)象少（圖３－２?ａ），愈傷組織的生長旺盛，顆粒碩大，顏色亮黃，??在光照篩選條件下長出的新愈傷組織較多抗性愈傷率....

３．５多基因的遺傳轉(zhuǎn)化??將多基因載體（分別命名為Ｐ５、Ｐ８）通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化到秈稻明恢８６中。??本實驗采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化秈稻明恢８６愈傷組織的遺傳轉(zhuǎn)化方法（圖３－５）。??通過胚性愈傷組織的誘導(dǎo)、繼代、侵染、共培養(yǎng)、篩選、分化、生根、煉苗等階??段，獲得８３株抗性植株。?....

３．７抗性植株的獲得及檢測??將多基因遺傳轉(zhuǎn)化載體Ｐ５、Ｐ８轉(zhuǎn)化秈稻明恢８６，已獲得抗性植株８３株（圖??３－６）。用ＧＵＳ引物進行ＰＣＲ檢測（圖３－７），結(jié)果顯示有些抗性植株為陽性植??株。但是用ＥＰＳＰＳ引物（圖３－８）、ＲＲＭ引物（圖３－９）、ＨＳ引物（圖３－１０）、??Ｉ....

本文編號：3990067