再生,即發(fā)育成熟的個(gè)體,受到機(jī)械或自然傷害后的組織,仍然存在在原有基礎(chǔ)上發(fā)育成完整個(gè)體的能力。與哺乳動物相反的是,硬骨魚魚鰭組織在剪鰭后具有很強(qiáng)的再生潛能,其尾鰭再生過程是研究組織再生分子基礎(chǔ)的一個(gè)重要模型。最近,斑馬魚作為組織或器官遺傳學(xué)研究的模式脊椎動物而出現(xiàn),對傷害的反應(yīng),斑馬魚主要的鰭結(jié)構(gòu)再生的非�？�,在剪鰭或損傷后,由各種再生相關(guān)基因表達(dá)引起級聯(lián)反應(yīng),使得丟失尾鰭結(jié)構(gòu)仍然能夠恢復(fù)到原來的大小。因?yàn)榛|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的降解和重塑有關(guān),能夠影響細(xì)胞遷移,是細(xì)胞外基質(zhì)在健康、疾病、發(fā)育、再生過程中周轉(zhuǎn)的關(guān)鍵酶。所以,我們又對mmp9和mmp13這兩個(gè)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,在NCBI GeneBank中,查找到mmp9 cDNA序列全長2801 bp,其中102bp的5ˊUTR區(qū)和656 bp的3ˊUTR區(qū),ORF長2043 bp,編碼680個(gè)氨基酸序列,相對分子質(zhì)量是76589.27 Da,等電點(diǎn)pI為5.63。對蛋白的二級結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)α螺旋有145個(gè),占2...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 再生的研究
        1.1.1 再生生長機(jī)制
        1.1.2 不同組織再生研究
    1.2 魚鰭再生研究
        1.2.1 魚鰭再生的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 斑馬魚魚鰭基本結(jié)構(gòu)
        1.2.3 斑馬魚魚鰭再生過程
        1.2.4 尾鰭再生相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)組織
        1.2.5 基質(zhì)金屬蛋白酶及可能參與魚鰭再生的其它基因
    1.3 血根堿對炎癥的抗性以及對再生的促進(jìn)作用
    1.4 魚鰭再生研究現(xiàn)狀及目的和意義
        1.4.1 魚鰭再生研究現(xiàn)狀
        1.4.2 魚鰭再生研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 克隆載體和宿主菌
        2.1.3 常用儀器和設(shè)備
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要溶液配方
    2.2 方法
        2.2.1 再生魚鰭RNA的提取
        2.2.2 反轉(zhuǎn)錄cDNA
        2.2.3 制備斑馬魚尾鰭再生石蠟切片
        2.2.4 石蠟切片HE染色
        2.2.5 血根堿飼養(yǎng)斑馬魚
        2.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量(Real-time quantitative PCR)
        2.2.7 原位雜交研究mmp9和mmp13兩個(gè)基因在尾鰭再生部位的表達(dá)
3 結(jié)果與分析
    3.1 再生尾鰭RNA的提取
    3.2 魚鰭再生的形態(tài)學(xué)分析
    3.3 mmp9和mmp13基因序列分析
        3.3.1 mmp9基因序列分析
        3.3.2 mmp13基因序列分析
    3.4 基因mmp9和mmp13在魚鰭再生過程中的表達(dá)模式
        3.4.1 基因mmp9和mmp13表達(dá)水平分析
        3.4.2 原位雜交結(jié)果分析
    3.5 血根堿溶液最終濃度的確定
    3.6 血根堿溶液處理后再生尾鰭的形態(tài)學(xué)變化
    3.7 血根堿處理對mmp9和mmp13的表達(dá)水平的影響
    3.8 血根堿處理對魚鰭再生相關(guān)基因表達(dá)水平的影響
4 討論
    4.1 斑馬魚尾鰭再生中的基因表達(dá)水平分析
    4.2 血根堿處理對魚鰭再生中基因表達(dá)的影響
    4.3 結(jié)論和展望
參考文獻(xiàn)
致謝
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