目的 原核表達古爾圖病毒（Guertu virus, GTV）糖蛋白截短片段（Gn、Gn1、Gn2、Gn3、Gc1和Gc2）,分別純化Gn-His、Gc1-His和Gc2-His重組蛋白并制備其多克隆抗體。方法 采用RT-PCR的方法分別擴增得到GTV DXM毒株截短糖蛋白Gn、Gn1、Gn2、Gn3、Gc1和Gc2基因片段,并將其構(gòu)建到原核表達載體pET-32a（＋）中,繼而轉(zhuǎn)化到E.coli BL21（DE3）中進行誘導(dǎo)表達,SDS-PAGE分析蛋白質(zhì)大小。經(jīng)鎳柱親和層析純化Gn-His、Gc1-His和Gc2-His重組蛋白,用GTV陽性羊血清通過Western blot法檢測重組蛋白的抗原性。用純化的蛋白質(zhì)分別免疫新西蘭白兔制備抗血清,ELISA法檢測血清效價。將構(gòu)建的真核表達載體pcDNA3.1-Gn和pcDNA3.1-Gc1/Gc2轉(zhuǎn)染至哺乳動物Vero細胞,并用間接免疫熒光法評估前述制備的兔多克隆抗體的結(jié)合活性。最后用Western blot法檢測血清與重組蛋白的特異性反應(yīng)能力。結(jié)果 雙酶切鑒定和測序結(jié)果表明pET-32a-Gn、pET-32a-Gn1/Gn2/Gn3、p... 

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期刊論文
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