研究背景與研究目的:擴(kuò)張型心肌�。―CM）是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的心肌病,主要表現(xiàn)為心室腔擴(kuò)張以及心肌收縮力減弱,臨床上擴(kuò)張型心肌病患者常發(fā)生進(jìn)行性充血性心力衰竭、血栓栓塞以及心律失常等并發(fā)癥,死亡率高,然而目前尚無(wú)十分有效的防治方法。DCM可能由包括缺血損傷以及家族遺傳缺陷等多方面的原因引起,然而,在大多數(shù)情況下,DCM的發(fā)病原因仍然是未知的,并且其潛在的調(diào)節(jié)途徑仍不明確。哺乳動(dòng)物的Hippo信號(hào)通路是一條進(jìn)化上相對(duì)保守的信號(hào)通路,TEAD1是Hippo信號(hào)通路下游的轉(zhuǎn)錄因子,當(dāng)與轉(zhuǎn)錄共激活因子結(jié)合,可形成的不同復(fù)合物,調(diào)節(jié)對(duì)于胚胎發(fā)育,心臟、肌肉等器官形成至關(guān)重要的基因的表達(dá)。現(xiàn)有文獻(xiàn)資料表明,Tead1及其上游調(diào)節(jié)因子在胚胎和圍產(chǎn)期的心肌細(xì)胞增殖中起關(guān)鍵作用,而最近的研究也證明哺乳動(dòng)物Hippo-Tead1信號(hào)通路在損傷后心肌細(xì)胞再生中的作用。然而,TEAD1在成年心臟中的作用及其具體的作用機(jī)制目前并不明確,本文旨在探索TEAD1在成年小鼠心臟中的作用以及相關(guān)機(jī)制,從而為相關(guān)心臟疾病的預(yù)防與治療提供新的作用靶點(diǎn)與研究思路。實(shí)驗(yàn)方法:TEAD1在成年小鼠中全身性與心肌細(xì)胞特異性誘導(dǎo)性敲... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：142 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
引言
第一部分 TEAD1 在成年小鼠中的全身性敲除表型分析與細(xì)胞水平機(jī)制研究
    實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)小鼠
            1.2 試劑耗材
            1.3 試劑配制
            1.4 主要儀器設(shè)備
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 Tamoxifen腹腔注射給藥
            2.2 小鼠基因型鑒定
            2.3 小鼠經(jīng)胸心臟超聲
            2.4 組織切片染色
            2.5 組織免疫熒光
            2.6 western blot免疫印記檢測(cè)
            2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    結(jié)果
        2.1 TEAD1 基因時(shí)間誘導(dǎo)性的全身性敲除鑒定
        2.2 Tead1 基因全身性敲除導(dǎo)致擴(kuò)張性心肌病以及心力衰竭
        2.3 Tead1 基因全身性敲除導(dǎo)致心肌細(xì)胞程序性壞死而非細(xì)胞凋亡
    討論
        3.1 TEADs在各組織器官的研究以及TEAD1 在心臟中的重要作用
        3.2 細(xì)胞死亡主要方式
        3.3 程序性壞死通路組成與調(diào)節(jié)
            3.1.1 RIP1 的泛素化與激酶活性
            3.1.2 RIP3 自磷酸化與MLKL磷酸化
            3.1.3 細(xì)胞程序性壞死與細(xì)胞凋亡的相互制約
    結(jié)論
第二部分 TEAD1在成年小鼠中的心肌細(xì)胞特異性敲除的表型分析與細(xì)胞水平機(jī)制研究
    實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)小鼠
            1.2 試劑耗材
            1.3 試劑配制
            1.4 主要儀器設(shè)備
        2 室驗(yàn)方法
            2.1 小鼠基因型鑒定
        3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    結(jié)果
        2.1 TEAD1 基因心肌細(xì)胞特異性敲除鑒定
        2.2 Tead1 心肌細(xì)胞特異性敲除導(dǎo)致小鼠擴(kuò)張性心肌病與心力衰竭
        2.3 Tead1 心肌細(xì)胞特異性敲除導(dǎo)致心肌細(xì)胞壞死而非細(xì)胞凋亡
    討論
        3.1 心肌細(xì)胞死亡與心力衰竭
        3.2 TEAD1 在小鼠胚胎期與成年期心肌細(xì)胞中的作用
    結(jié)論
第三部分 成年小鼠的心肌細(xì)胞TEAD1基因缺失導(dǎo)致心肌細(xì)胞程序性壞死的分子機(jī)制研究
    實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)小鼠
            1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
            1.3 試劑耗材
            1.4 試劑配制
            1.5 主要儀器設(shè)備
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 Seahorse生物能量代謝實(shí)時(shí)測(cè)定儀檢測(cè)小鼠心臟線粒體功能
            2.2 小鼠心肌組織線粒體復(fù)合體I(CI)酶活性檢測(cè)
            2.3 小鼠心肌組織染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP assay)
            2.4 10T1/2與L929 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.5 4OH-TAM處理成鼠心肌細(xì)胞(CMs)
            2.6 細(xì)胞蛋白樣品Western blot免疫印記
            2.7 成鼠心肌細(xì)胞PI staining
            2.8 成鼠心肌細(xì)胞TMRM染色
            2.9 成鼠心肌細(xì)胞MitoSOX染色
            2.10 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)啟動(dòng)子活性(Ndufa5,Ndufab1)
        3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    結(jié)果
        2.1 生物信息分析
        2.2 Tead1 基因心肌細(xì)胞特異性敲除導(dǎo)致小鼠心肌細(xì)胞線粒體功能障礙
        2.3 心肌細(xì)胞Tead1 基因敲除干擾線粒體復(fù)合體I亞基Ndufab1/Ndufa5 的轉(zhuǎn)錄
        2.4 成年小鼠心肌細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)
            2.4.1 4OH-TAM體外處理心肌細(xì)胞可成功敲除Tead1 基因
            2.4.2 體外敲除心肌細(xì)胞Tead1 基因?qū)е滦募〖?xì)胞壞死與線粒體功能障礙
    討論
        3.1 線粒體功能障礙常見(jiàn)原因與心臟疾病
            3.1.1 線粒體生物發(fā)生缺陷
            3.1.2 線粒體動(dòng)力學(xué)缺陷
            3.1.3 線粒體復(fù)合體組裝缺陷
        3.2 TEAD1 可能作用的線粒體復(fù)合體I亞基在疾病中的研究
        3.3 線粒體超氧化物與心臟疾病
        3.4 MPTP開(kāi)放介導(dǎo)心肌細(xì)胞壞死
        3.5 YAP與 TEAD1 成年心臟穩(wěn)態(tài)維持中的作用不同？
    結(jié)論
第四部分 Nec-1 可減輕TEAD1 基因心肌細(xì)胞缺失導(dǎo)致心肌細(xì)胞壞死以及心力衰竭
    實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)小鼠
            1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
            1.3 試劑耗材
            1.4 試劑配制
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 TNFa/Nec-1 處理L929 細(xì)胞
            2.2 LDH(乳酸脫氫酶)法細(xì)胞毒性檢測(cè)
        3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    結(jié)果
        2.1 Nec-1 可部分緩解TEAD1icKO小鼠的擴(kuò)張型心肌病與心力衰竭
        2.2 Nec-1 抑制TEAD1icKO小鼠心肌細(xì)胞程序性壞死
    討論
        3.1 RIP1 激酶抑制劑Nec-1 在不同疾病模型中的保護(hù)作用
        3.2 RIP1 激酶抑制劑Nec-1 的應(yīng)用前景
    結(jié)論
全文總結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3640928