本文關鍵詞：沉默ACTN1基因表達能抑制腎癌細胞的生長且誘導細胞凋亡，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討ACTN1基因(α-actin 1)表達與腎細胞癌發(fā)病的相關性。在其它類型腫瘤(結腸癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌等)中已經(jīng)證實ACTN基因在癌組織中是高表達的,但是ACTN1基因與腎癌的關系尚不清楚。若能證明ACTN1基因在腎細胞癌中同樣高表達,在體外功能實驗中觀察沉默ACTN1基因的表達之后,否能影響腎癌細胞的生長及凋亡。方法收集38例腎癌患者的腎癌組織及相對應的癌旁組織通過實時定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)和免疫印跡(western-blotting,WB)的方法來觀察ACTN1基因在癌組織中的表達情況。設計針對ACTN1基因的siRNA來沉默該基因在腎癌細胞系786-O和A704中的表達,通過與空白對照組和陰性對照組之間的對比觀察ACTN1基因對腎癌細胞系的生長、增殖、侵襲、遷徙、凋亡、以及細胞周期等方面的影響。通過測序的方法探索影響腎癌組織中ACTN1基因高表達的影響因素。結果1.在38例腎癌患者的腎癌組織中ACTN1的表達比相對應的癌旁組織要高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。2.siRNA能有效地、特異地下調(diào)腎癌細胞系786-O和A704中ACTN1基因mRNA(P0.01)和蛋白的表達。3.ACTN1基因表達的下調(diào)會抑制腎癌細胞系786-O和A704增殖、侵襲、遷移。4.ACTN1基因表達的下調(diào)會誘導腎癌細胞系786-O和A704的凋亡。5.ACTN1基因表達的下調(diào)會影響腎癌細胞系786-O和A704細胞周期,使細胞周期停滯在G0/G1期。6.腎癌中ACTN1基因的高表達可能與基因拷貝數(shù)變異(copy number alterations,CNAs)有關。結論1.ACTN1基因在腎細胞癌中的高表達提示該基因在腎細胞癌發(fā)生發(fā)展的過程中起到重要的作用,是腎癌形成的相關癌基因之一;2.下調(diào)ACTN1基因的表達可抑制腎癌細胞系的增殖、侵襲、遷移,說明ACTN1基因可能在腎細胞癌中對腫瘤的生長、向周圍組織侵犯、遠處轉移的方面起著至關重要的作用。3.下調(diào)ACTN1基因的表達會有到腎癌細胞系發(fā)生凋亡,且起到阻滯細胞周期的作用。
【關鍵詞】：腎細胞癌 ACTN1基因 小干擾RNA
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-7
• 一 前言7-10
• 1.1 腎細胞癌7
• 1.2 腎細胞癌基因學及靶向治療的研究現(xiàn)狀7-8
• 1.3 ACTN1與腫瘤的關系8-9
• 1.4 本研究設計思路9-10
• 二 材料與方法10-19
• 2.1 腎癌組織樣本的收集10
• 2.2 主要試劑和儀器10-12
• 2.3 細胞培養(yǎng)12
• 2.4 細胞轉染12
• 2.5 實時定量PCR12-14
• 2.5.1 RNA組織的提取13
• 2.5.2 去基因組13-14
• 2.5.3 純度檢測14
• 2.5.4 逆轉錄14
• 2.5.5 PCR定量14
• 2.6 Western blot檢測14-16
• 2.6.1 SDS-PAGE電泳分離膠的配制14-15
• 2.6.2 SDS-PAGE電泳濃縮膠的配制15
• 2.6.3 樣品的處理15
• 2.6.4 免疫印跡（Western Blotting）15-16
• 2.7 cck-8 試驗測試細胞增殖能力16
• 2.8 transwell法檢測細胞遷移能力16
• 2.9 transwell法檢測細胞侵襲能力16-17
• 2.10 細胞劃痕試驗17
• 2.11 細胞凋亡檢測17-18
• 2.12 細胞周期分析18
• 2.13 統(tǒng)計學方法18
• 2.14 測序方法探索ACTN1基因在RCC中高表達的影響因素18-19
• 三 結果19-26
• 3.1 ACTN1 mRNA水平在RCC患者的腫瘤組織中高于癌旁正常組織19-20
• 3.2 ACTN1 siRNA有效下調(diào)腎癌細胞系中ACTN1 mRNA和蛋白的表達20-21
• 3.3 ACTN1 siRNA抑制腎癌細胞的增殖21-22
• 3.4 Transwell法證實ACTN1 siRNA抑制腎癌細胞的侵襲和遷移22-23
• 3.5 細胞劃痕實驗證實ACTN1 siRNA使腎癌細胞的侵襲力下降23-24
• 3.6 ACTN1 siRNA誘導腎癌細胞系凋亡24
• 3.7 下調(diào)ACTN1基因阻斷腎癌細胞系細胞周期進程24-25
• 3.8 RCC腫瘤組織ACTN1過表達可能受基因拷貝數(shù)變異影響25-26
• 四 討論26-27
• 五 結論27-28
• 參考文獻28-31
• 縮略詞表31-32
• 綜述：單細胞轉錄組測序在腫瘤異質(zhì)性研究及臨床中的應用32-43
• 參考文獻39-43
• 在學期間研究成果43-44
• 致謝44

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