本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)定表達(dá)NLRC5基因肝癌細(xì)胞株的建立

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【摘要】：目的建立起能夠穩(wěn)定表達(dá)NLRC5基因的肝癌Hep G2細(xì)胞株。方法設(shè)計(jì)遺傳霉素(G418)的濃度梯度,通過對(duì)Hep G2細(xì)胞篩選最終確定篩選藥物濃度。將構(gòu)建好的人源p EGFP-C2-NLRC5重組質(zhì)粒利用脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染至Hep G2肝癌細(xì)胞株中,用G418篩選出耐藥陽性克隆。通過免疫熒光技術(shù)觀察綠色熒光蛋白穩(wěn)定表達(dá)情況,Western blot法驗(yàn)證NLRC5蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 G418在14 d內(nèi)使Hep G2細(xì)胞全部死亡的最小濃度是300 ng/ml。用G418篩選瞬轉(zhuǎn)p EGFP-C2-NLRC5 14 d在熒光顯微鏡下可見耐藥克隆的形成。Western blot法檢測(cè)顯示,穩(wěn)定過表達(dá)組NLRC5的蛋白水平比空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組高(t=15.356,P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)NLRC5基因的肝癌細(xì)胞株,為進(jìn)一步研究NLRC5基因在肝癌的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院;合肥瑤海區(qū)長(zhǎng)淮街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心;
【關(guān)鍵詞】： NLRC 肝癌 穩(wěn)定細(xì)胞株 HepG
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):81473268、81202978) 安徽省自然科學(xué)基金(編號(hào):1308085MH145)
【分類號(hào)】：R735.7
【正文快照】： 2015-10-20接收肝細(xì)胞肝癌約占原發(fā)性肝癌的90%,已成為全世界最常見的惡性腫瘤之一,其死亡率在腫瘤相關(guān)死因中位列第三[1]。而肝癌的發(fā)生、發(fā)展主要與肝臟慢性炎癥等免疫反應(yīng)所導(dǎo)致的肝細(xì)胞反復(fù)損傷與增生密切相關(guān)[2-3],深入了解和掌握免疫反應(yīng)的分子機(jī)制將為今后治療與炎癥相

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1069009