第 1 章   引言

近年來(lái)女性生殖道惡性腫瘤的發(fā)病率明顯升高，成為影響人類(lèi)生活質(zhì)量水平的巨大問(wèn)題。宮頸癌（Cervical Cancer  ，CC）是當(dāng)前婦科惡性腫瘤發(fā)病率排行第一的疾病，因其癌細(xì)胞發(fā)展迅速和極易復(fù)發(fā)的特征，是全球癌癥第六大死亡相關(guān)因素[1]。它早期篩查的手段主要是通過(guò)薄層液基細(xì)胞學(xué)（Thinprep cytologic test  ，TCT）和人乳頭瘤病毒(Human  papilloma  viruses  ，HPV)檢測(cè)，進(jìn)而針對(duì)高危險(xiǎn)的人群進(jìn)行電子陰道鏡檢查及組織活檢，最后做出診斷[2]。統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，TCT的臨床陽(yáng)性預(yù)測(cè)值較高，但耗時(shí)長(zhǎng)，且需要有經(jīng)驗(yàn)的細(xì)胞病理學(xué)家讀片，而單獨(dú) HPV 檢測(cè)缺乏診斷特異性。子宮內(nèi)膜癌（Endometrial carcinoma，EC）是在我國(guó)發(fā)病率僅次于子宮頸癌，在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家女性生殖道惡性腫瘤發(fā)病率排行第一的疾病[3]。它的臨床表現(xiàn)主要表現(xiàn)為絕經(jīng)后陰道出血。絕大多數(shù)患者在出現(xiàn)臨床癥狀后來(lái)院就診，通過(guò)診斷性刮宮及病理活檢可以確診，經(jīng)過(guò)手術(shù)及（或）放化療手段可以達(dá)到 75%~83%的五年存活率。但仍有部分患者因就診晚、病灶小漏刮或特殊病理類(lèi)型等因素，預(yù)后差，復(fù)發(fā)率高。因此，尋找一種快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、敏感度高的早期篩查婦科惡性腫瘤的手段具有迫切性和必要性。
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第 2 章   材料與方法

2.1  實(shí)驗(yàn)材料
癌癥病例入選標(biāo)準(zhǔn)：選取南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院、江西省婦幼保健院、江西省腫瘤醫(yī)院、南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院 2013 年1月至2013年10 月來(lái)院診治的宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌患者共 70例。所有患者入院時(shí)未并發(fā)其他腫瘤，取材前未行放化療、手術(shù)等治療，無(wú)免疫及代謝性疾病。術(shù)后病理診斷與術(shù)前一致。 對(duì)照組病例入選標(biāo)準(zhǔn)：選取南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院 2013 年 1 月至 2013 年10 月來(lái)院常規(guī)體檢中正常生育期的婦女 70 例。排除婦科惡性腫瘤、肺部腫瘤、消化道腫瘤、慢性腎衰竭等。月經(jīng)周期規(guī)律。 詳細(xì)記錄兩組患者的年齡及診斷等基本信息，檢查時(shí)間均選擇在非月經(jīng)期。取材前 3 天無(wú)性交史，無(wú)陰道用藥或陰道沖洗。常規(guī)進(jìn)行外陰消毒，利用窺陰器擴(kuò)張陰道,暴露宮頸、陰道后彎窿，將特制滅菌棉拭子放置在宮頸管處，刮取少許陰道分泌物放置于 1.5 mL 規(guī)格的 EP 管中。所有標(biāo)本采集完畢，凍存于－80℃超低溫冰箱。醫(yī)院倫理委員通過(guò)并準(zhǔn)許了本研究方案，患者均簽訂了知情同意書(shū)。

2.2  實(shí)驗(yàn)方法
設(shè)置 LTQ-MS 檢測(cè)模式為正離子模式，掃描檢測(cè)的范圍是 m/z 50~2000；電離電壓為 3.5 kV；離子傳輸管的溫度為 150 ℃；ESI  溶劑為甲醇/水/醋酸溶液（45:45:10, v:v:v）；霧化氣為氮?dú)猓兌?99.999%），壓力為1.0 MPa；ESI  溶劑和樣本溶液流速均為 5 μL/min； EESI  商用離子源的兩個(gè)毛細(xì)管?chē)婌F口到質(zhì)譜進(jìn)樣口的間距b為 5 mm；兩個(gè)毛細(xì)管?chē)婌F口的間距 a為5 mm；兩個(gè)毛細(xì)管?chē)婌F間的夾角、樣品毛細(xì)管?chē)婌F口與質(zhì)譜進(jìn)樣口間的角度分別為 60°和150°（如圖1 所示）；透鏡電壓為  80.0 V；毛細(xì)管電壓為 7 V；其余參數(shù)均由 LTQ-MS  軟件系統(tǒng)自動(dòng)優(yōu)化所得。

第3章  結(jié)果 ............... 7
3.1  樣品溶劑的選擇和初級(jí) ESI 溶劑優(yōu)化 ..................... 7
3.2 陰道分泌物的 EESI-MS 指紋譜圖 .......................... 7
3.3  不同病種的陰道分泌物的主成分分析 ................ 8
第4章  討論 ................... 17
4.1 EESI 技術(shù)的原理及特點(diǎn) .................... 18
4.2 EESI-MS 在生物醫(yī)學(xué)的應(yīng)用 ...................... 21
4.3 EESI-MS 在婦科惡性腫瘤的應(yīng)用 .....................22
4.4  結(jié)語(yǔ)與展望 ...............22
第5章  結(jié)論 .................24

第 4 章   討論

4.1 EESI 技術(shù)的原理及特點(diǎn)
總結(jié)得出，與傳統(tǒng)質(zhì)譜技術(shù)相比,電噴霧萃取電離質(zhì)譜具有許多獨(dú)特的特點(diǎn)：（1）EESI可以在三維空間完成離子化，能夠在較長(zhǎng)時(shí)間、較大空間上對(duì)復(fù)雜基質(zhì)樣品進(jìn)行分散，其穩(wěn)定性、靈敏度都更高。（2）EESI 可以直接實(shí)時(shí)在線(xiàn)快速的進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，無(wú)需對(duì)待檢樣本進(jìn)行繁瑣的預(yù)處理，省時(shí)省力，適合臨床病情瞬息萬(wàn)變的檢測(cè)要求；（3）EESI 待測(cè)的樣品無(wú)需和高壓直接接觸，是溫和的軟電離，非常適合檢測(cè)蛋白類(lèi)物質(zhì)等；（4）EESI 的適用范圍廣，能夠承受各種形態(tài)、性質(zhì)的復(fù)雜基質(zhì)，并可以有效保持它們的原生態(tài)；（5）電噴霧通道和樣品進(jìn)入通道的設(shè)計(jì)使得待測(cè)物本體避免了與萃取溶劑的污染或者物理?yè)p害等；（5）EESI-MS 能夠較為簡(jiǎn)易的進(jìn)行選擇性分子-離子、離子-離子反應(yīng)的研究；（6）EESI離子源的兼容性好，可以結(jié)合多種技術(shù)或者儀器進(jìn)行分析檢測(cè)，滿(mǎn)足臨床上床旁檢測(cè)的需求；（7）檢測(cè)速度快，可以達(dá)到高通量的檢測(cè)要求；（8）待測(cè)樣品即使< 0.05 mL  液體樣品也可以獲得分析數(shù)據(jù)，檢測(cè)所需的量很小；（9）萃取的溶劑量小，制作簡(jiǎn)單，費(fèi)時(shí)、費(fèi)材少；（10）可以準(zhǔn)確的區(qū)分不同樣品的離子，準(zhǔn)確性高；（11）EESI-MS 檢測(cè)相較于 TOF-MS 等更為廉價(jià)，有望普及檢測(cè)。

4.2 EESI-MS 在生物醫(yī)學(xué)的應(yīng)用
另外，Jackson 等[49]通過(guò) EESI 在細(xì)菌中檢測(cè)到了靶向代謝物，如 α-酮戊二酸及 6-磷酸葡萄糖酸等。Chen 等[50]采用基于EESI-TOF-MS 的方法對(duì)人體所呼出的氣體進(jìn)行質(zhì)譜分析，成功在其中檢測(cè)到許多與人體生命活動(dòng)相關(guān)的代謝物。他還利用 ND-EESI-MS 對(duì)人體不同部位的皮膚進(jìn)行檢測(cè)，成功通過(guò)不同信號(hào)強(qiáng)度的代謝產(chǎn)物來(lái)解讀人體代謝的過(guò)程[44]。Ding等[51]根據(jù)志愿者抽煙前、后的呼出氣體 EESI-MS 指紋圖譜研究了人體內(nèi)尼古丁的代謝情況，并證明了 EESI-MS 在處理復(fù)雜樣品時(shí)具備了高靈敏性，高特異性和高通量的特點(diǎn)，特別是對(duì)于體內(nèi)代謝組學(xué)研究的半定量分析。
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第 5 章   結(jié)論

1、采用 EESI-MS 技術(shù)，，在無(wú)需復(fù)雜樣品預(yù)處理的條件下，成功獲取不同陰道分泌物的指紋譜圖。
2、EESI 成功電離復(fù)雜基質(zhì)的陰道分泌物樣品，并成功獲取可靠的指紋譜圖數(shù)據(jù)。
3、結(jié)合 PCA 方法成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌患者和婦科良性疾病患者陰道分泌物進(jìn)行有效快速地區(qū)分。

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參考文獻(xiàn)（略）