目的:早在金元時期,就認為針刺“足三里”穴具有補益脾胃元氣、提高胃經(jīng)氣血運行能力之功。本實驗將40只SD大鼠隨機分為四組,分別為正常組、脾氣虛組、足三里組和非經(jīng)非穴組,除正常組外,其余三組采用“飲食不節(jié)”結(jié)合“勞倦過度”的復合因素建立脾氣虛證大鼠模型。造模成功后,足三里組和非經(jīng)非穴組分別給予電針雙側(cè)“足三里”穴和非經(jīng)非穴點干預處理7日。應用Q-PCR、ELISA方法檢測大鼠下丘腦及小腸組織與能量代謝相關(guān)的腦腸肽的基因及蛋白表達,應用Q-PCR、WB方法檢測大鼠胃及骨骼肌組織NRF1及NRF2的基因及蛋白表達,旨在從能量代謝角度探討電針大鼠雙側(cè)“足三里”穴對脾氣虛大鼠的調(diào)控機制,為針灸的臨床治療提供理論依據(jù)。材料與方法:40只SD大鼠按隨機數(shù)字表法分為4組,分別為正常組、脾氣虛組、足三里組和非經(jīng)非穴組,每組10只。所有大鼠于我校動物實驗中心適應性飼養(yǎng)7日后,正常組大鼠每日自由飲水進食,其余各組大鼠采用“飲食不節(jié)”結(jié)合“勞倦過度”復合因素復制脾氣虛證候模型,5個周期后大鼠出現(xiàn)食欲不振(食量減少)、神疲乏力、毛色不榮、形體瘦削,嗜睡扎堆等癥狀,符合《中醫(yī)實驗動物模型方法學》~([1])中對于脾氣虛證的評定標準,提示脾氣虛證大鼠模型造模成功,開始正常飼養(yǎng)并進行電針干預處理。正常組和脾氣虛組每日在操作臺上固定20min,不予以其它處理;足三里組給予電針雙側(cè)“足三里”穴進行毫針針刺,非經(jīng)非穴組給予電針雙側(cè)“非經(jīng)非穴點”(雙側(cè)髂嵴上10-15mm、后正中線旁開20mm區(qū)段內(nèi)選擇一個固定對照點確定為非經(jīng)非穴點)~([2]),分別以毫針直刺5mm,接華佗牌電針儀(SDZ-Ⅱ型),采用疏密波刺激(密波15Hz,疏波2Hz),電流0.5mA。電針持續(xù)20min,每日1次。干預處理7日后,各組大鼠禁食不禁水24h,次日用10%水合氯醛腹腔麻醉(3ml/kg體重)。開腹,取胃及小腸組織用PBS溶液清洗干凈,斷頭取下丘腦組織,剪開大鼠后肢皮膚、取股四頭肌組織,所有組織均于液氮浸泡后凍存于-80℃冰箱保存?zhèn)溆�。采用Elisa方法檢測大鼠下丘腦及小腸組織Ghrelin、VIP、CCK蛋白含量變化;熒光定量PCR方法檢測下丘腦及小腸組織Ghrelin、VIP、CCK及其受體的mRNA表達;熒光定量PCR法檢測大鼠胃及骨骼肌組織NRF1及NRF2 mRNA表達水平;Western Blot方法檢測大鼠胃及骨骼肌組織內(nèi)NRF1及NRF2蛋白含量變化。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行處理分析,結(jié)果以均值±標準差(`x±s)表示。組間兩兩比較采用單因素方差分析,組間方差齊采用LSD檢驗法,方差不齊采用Tamhane’s T2(M)檢驗。P﹤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果:1.各組大鼠腦腸肽及其受體的基因表達1.1各組大鼠Ghrelin及其受體的基因表達統(tǒng)計結(jié)果顯示:與正常組比較,脾氣虛組和非經(jīng)非穴組大鼠小腸組織Ghrelin含量降低(P﹤0.05),小腸及下丘腦組織Ghrelin及其受體的mRNA表達下調(diào);與脾氣虛組相比,足三里組Ghrelin含量升高(P﹤0.05),小腸及下丘腦組織Ghrelin及其受體的mRNA表達上調(diào)(P﹤0.05),非經(jīng)非穴組未見顯著性差異(P﹥0.05)。1.2各組大鼠VIP及其受體的基因表達統(tǒng)計結(jié)果顯示:與正常組比較,脾氣虛組和非經(jīng)非穴組大鼠小腸組織VIP含量降低(P﹤0.05),小腸及下丘腦組織VIP及其受體的mRNA表達下調(diào);與脾氣虛組相比,足三里組VIP含量升高(P﹤0.05),小腸及下丘腦組織VIP及其受體的mRNA表達上調(diào)(P﹤0.05),非經(jīng)非穴組未見顯著性差異(P﹥0.05)。1.3各組大鼠CCK及其受體的基因表達統(tǒng)計結(jié)果顯示:與正常組比較,脾氣虛組和非經(jīng)非穴組大鼠小腸組織CCK含量升高(P﹤0.05),小腸及下丘腦組織CCK及其受體的mRNA表達上調(diào);與脾氣虛組相比,足三里組CCK含量降低(P﹤0.05),小腸及下丘腦組織CCK及其受體的mRNA表達下調(diào)(P﹤0.05),非經(jīng)非穴組未見顯著性差異(P﹥0.05)。2.各組大鼠胃及骨骼肌組織內(nèi)NRF1及NRF2的基因表達統(tǒng)計結(jié)果顯示:與正常組比較,脾氣虛組和非經(jīng)非穴組大鼠胃和骨骼肌組織內(nèi)NRF1及NRF2蛋白表達顯著減少,NRF1及NRF2 mRNA表達明顯下調(diào)(P﹤0.01);與脾氣虛組相比,足三里組大鼠胃和骨骼肌組織內(nèi)NRF1及NRF2蛋白表達顯著增加,NRF1及NRF2 mRNA表達明顯上調(diào)(P﹤0.01),非經(jīng)非穴組未見顯著性差異(P﹥0.05)。結(jié)論:1.針刺“足三里”穴通過調(diào)節(jié)脾氣虛大鼠腦腸肽Ghrelin、VIP、CCK,及其受體的表達水平,發(fā)揮其外周和中樞效應從能量代謝角度對大鼠的脾氣虛證起到調(diào)控作用。2.電針“足三里”穴可以調(diào)節(jié)脾氣虛大鼠肌肉組織內(nèi)NRF1及NRF2基因及蛋白的異常表達,參與線粒體能量代謝的調(diào)控作用進而改善脾氣虛證。
【學位單位】：遼寧中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R245
【部分圖文】：

基于腦腸肽和核呼吸因子 NRF1、NRF2 研究電針對脾氣虛模型大鼠的調(diào)控機制實驗結(jié)果各組大鼠一般狀態(tài)觀察大鼠始終體格健壯、毛色光滑潤澤、反應靈敏；其余 3 組大鼠欲不振（食量減少）、體重減輕，15 日后表現(xiàn)出嗜睡扎堆、反槁無華，形體明顯瘦削等癥狀。符合全國中西醫(yī)結(jié)合虛證與于 1986 年制定的脾氣虛證的宏觀診斷標準。干預處理 7 日后，足三里組大鼠進食量逐漸增多、嗜睡減輕，穴組與電針干預前相比，一般狀態(tài)未見明顯改善。造模前、大鼠體重及抓力變化情況見圖 1，表 2，圖 2。

圖 2 各組大鼠抓力變化情況（g）組織 Ghrelin、VIP、CCK 蛋白含量比較示：與正常組相比，脾氣虛組和非經(jīng)非穴組大鼠小腸組 含量升高（P﹤0.05）；與脾氣虛組相比，足三里組 G降低（P﹤0.05），非經(jīng)非穴組未見顯著性差異（P﹥0大鼠小腸組織 Ghrelin、VIP、CCK 蛋白含量（pg/mL）樣本數(shù)（n） Ghrelin VIP 10 291.74±55.28 46.62±5.42 10 164.37±19.34▲17.26±17.56▲10 252.44±24.57●56.36±5.74●10 185.27±34.77▲28.94±7.32▲比，▲代表 P﹤0.05；與脾氣虛組相比，●代表 P﹤0.05

圖 2 各組大鼠抓力變化情況（g）小腸組織 Ghrelin、VIP、CCK 蛋白含量比較果顯示：與正常組相比，脾氣虛組和非經(jīng)非穴組大鼠小腸組織CCK 含量升高（P﹤0.05）；與脾氣虛組相比，足三里組 Ghre 含量降低（P﹤0.05），非經(jīng)非穴組未見顯著性差異（P﹥0.05）各組大鼠小腸組織 Ghrelin、VIP、CCK 蛋白含量（pg/mL）（ 樣本數(shù)（n） Ghrelin VIP 10 291.74±55.28 46.62±5.42 1 10 164.37±19.34▲17.26±17.56▲14 10 252.44±24.57●56.36±5.74●10 10 185.27±34.77▲28.94±7.32▲14組相比，▲代表 P﹤0.05；與脾氣虛組相比，●代表 P﹤0.05。
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本文編號：2881942